前言 癌基因的激活与抑癌基因的失活是癌症发生发展过程中两个重要的分子遗传学改变。抑癌基因失活最常见的模式为一对等位抑癌基因先后经历失活性突变及丢失而丧失功能。伴随抑癌基因丢失,该区域染色体内某些特定标记位点由正常状态下的杂合性变成了丢失后的纯合性。通过对肿瘤患者进行基因组扫描,对这种杂合性丢失进行分析,可以找到侯选抑癌基因,进而揭示肿瘤致病的分子机理。 胃癌是源自胃粘膜上皮的恶性肿瘤,在我国发病率很高,死亡率占恶性肿瘤的第一位。它的发生分子机制十分复杂,通常涉及多基因、多阶段、多因素参与。有研究显示胃癌常于多个染色体区域发生丢失。然而以往研究在进行杂合性丢失(Loss of Heterozygosity,LOH)分析时直接采用肿瘤组织为模板,由于肿瘤细胞中混入了正常细胞,导致LOH检出率降低并影响结果可信度。而且,往往由于模板量的相对有限,难以对可疑模板的可疑位点继续进行高密度筛查。在本研究中,首先采用激光捕获显微切割(Laser Capture Microdissection,LCM)技术对肿瘤患者正常的胃粘膜细胞及相对应的肿瘤细胞进行特异性的捕获,去除组织异质性因素。然后利用多重置换扩增技术(Multiple Displacement Amplification,MDA)对LCM所获得的DNA进行高质量的全基因组扩增(Whole Genome Amplification,WGA)。最终利用扩增产物对胃癌患者全基因组扫描进行LOH分析。本文主要介绍1p35-pter的LOH分析。 材料与方法 一、材料