牛乳中β-乳球蛋白是一种主要的过敏原，大约有60％牛乳过敏人群对β-乳球蛋白过敏。牛乳β-乳球蛋白与水牛乳β-乳球蛋白存在免疫交叉反应，对牛乳β-乳球蛋白过敏的人群也可能对水牛乳β-乳球蛋白过敏。因此，从食物过敏的角度探索水牛乳β-乳球蛋白具有一定理论价值。另外，由于水牛乳消费人群逐渐增加，为了保护过敏患者的健康，开展水牛乳的过敏研究将具有重要现实意义。本研究的主要内容包括水牛乳β-乳球蛋白的分离纯化、兔抗水牛乳β-乳球蛋白多克隆抗体的制备以及水牛乳β-乳球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立。在水牛乳β-乳球蛋白的分离纯化过程中，建立了DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换结合Sephadex G-75凝胶层析分离纯化水牛乳β-乳球蛋白的方法。SDS-PAGE和IEF-PAGE鉴定结果表明，两种方法结合可以分离得到纯度＞90％的水牛乳β-乳球蛋白。在抗水牛乳β-乳球蛋白多克隆抗体的制备过程中，建立了间接ELISA检测水牛乳β-乳球蛋白抗血清效价的检测方法及制备抗水牛乳β-乳球蛋白多克隆抗体的程序。免疫2只日本大白兔分别获得了间接ELISA检测效价高达1：204800和1：102400及双向琼脂扩散检测效价均为1：16的抗血清。通过双向琼脂扩散试验证实了水牛乳β-乳球蛋白与牛乳β-乳球蛋白存在免疫交叉反应。建立了检测水牛乳β-乳球蛋白的间接竞争ELISA方法，确定的工作条件如下：包被抗原浓度2.5μg／mL，抗体稀释倍数为1：60000；二抗稀释倍数为1：10000。包被条件为4℃过夜；37℃封阻1h；孵育条件为37℃，1h；加终止液5min后比色。该方法检测的范围为0.1ng／mL～100ng／mL，灵敏度为5.75ng／mL，最低检出限＜0.01 ng／mL。用建立的方法对4份样品进行了检测，测得阳光酸酸乳、阳光核桃花生乳、皇氏水牛乳、壮牛水牛乳的β-乳球蛋白含量分别为0.36g／L、0.472g／L、1.097g／L、0.717g／L。