【摘 要】
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国内外近十几年来在SEA治疗肿瘤方面的研究成果指出:SEA靶向药物是SEA研究及应用的方向.利用已经构建好的,含有突变的sea基因的工程菌-大肠杆菌JM109(DE3)表达出对人体低毒性
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国内外近十几年来在SEA治疗肿瘤方面的研究成果指出:SEA靶向药物是SEA研究及应用的方向.利用已经构建好的,含有突变的sea基因的工程菌-大肠杆菌JM109(DE3)表达出对人体低毒性的SEA蛋白.考察SEA蛋白的最佳表达条件,分离SEA蛋白纯品并研究其部分基本性质,为大规模制备SEA蛋白并将其应用于开发免疫治疗肿瘤的靶向药物作准备.通过六个单因素考察大肠杆菌的生长、发酵条件和诱导剂IPTG诱导大肠杆菌中sea基因产生SEA蛋白的条件,确定SEA蛋白的最适表达条件为:装液量为50ml/三角瓶,诱导前生物量OD<,600>为0.8,诱导温度为32℃,诱导时间为8小时.在此条件下,SEA表达量占细胞总蛋白的37﹪.如此高效的SEA表达为国内外首次报道.在凝胶中通过拟亲和层析对SEA蛋白进行分离,利用含有NaCl的磷酸钠缓冲液进行洗脱,得到的洗脱液经过浓缩后,再通过Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到分子量不同的纯一的两种SEA蛋白:SEAI和SEAII.计算总收率为51.36﹪.这种两步分离纯化方法不仅简便、快速,而且收率高,比以前曾经报道的各种分步分离纯化方法更加适用于大规模制备SEA蛋白.对SEAI与SEAII进行部分理化性质研究.以上实验结果为SEA蛋白的大规模制备和SEA靶向药物的研究与开发奠定了基础.
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