南昌链霉菌NS3226属间接合转移系统的建立及染色体物理图谱构建的初步尝试

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本研究探索了将外源质粒pHZ1358和pSET152通过属间接合转移导入野生型南昌链霉菌NS3226的方法。 将克隆在整合型载体pSET152上的变铅青链霉菌1326的dnd基因簇通过接合转移导入野生型南昌链霉菌NS3226中进行异源表达,观察到接合转移子的DNA获得了在含Fe2+的电泳缓冲液中电泳时降解的表型。将利用pHZ1358构建的基因置换结构(孙宇晖,未发表)导入南昌链霉菌NS3226中进行了基因置换实验,协助完成了南昌霉素生物合成基因簇的克隆,但对另一潜在PKS基因簇的基因置换实验目前还未能完成。 本研究还对南昌链霉菌NS3226染色体的结构进行了探索,初步揭示野生型南昌链霉菌NS3226的染色体为线性DNA分子,末端具有共价结合的末端蛋白,染色体的末端可能处于染色体中最大的两条AseⅠ片段上。 此外,还开展了南昌链霉菌NS3226染色体物理图谱构建的前期研究工作:基本克隆到了南昌链霉菌NS3226染色体上全套的AseⅠ-BamHⅠ片段,以它们为探针从南昌链霉菌NS3226的基因文库中钓到164个阳性克隆,并从中筛选到34个AseⅠ linking cosmids,用BamHⅠ进行初步的酶谱分析,结果表明其中有20个cosmids的BamHⅠ酶谱相互间没有明显的重叠性。
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