研究目的小耳畸形是一种较常见的颅面部先天性疾病。由于小耳畸形主要以耳廓软骨发育不全为特征,因此本研究选择单纯、非综合征型小耳畸形患者为研究对象,利用scRNA-seq技术对两侧存在差异发育的耳软骨组织进行研究,从单个细胞水平了解小耳畸形发生的分子机制。研究方法选取2020年12月至2021年6月就诊于中国医学科学院整形外科医院外耳再造二中心的2例单侧、非综合征型小耳患者为研究对象,选择同一患者的健侧和患侧耳软骨进行scRNA-seq分析,构建耳软骨组织细胞谱系。根据各细胞群的差异表达基因等对其所属的细胞类型进行注释。针对干细胞群和软骨细胞群进行分析,寻找各群中的疾病差异表达基因,同时利用细胞拟时序分析探索细胞间分化轨迹。研究结果本研究成功构建了人耳软骨组织的单细胞转录图谱。针对干细胞研究中,共发现有4类干细胞类型,即基质祖细胞、肌成纤维细胞、内皮相关干细胞和软骨祖细胞。与对照组相比,病例组软骨祖细胞的细胞数目明显减少,并高表达与氧化磷酸化过程相关基因,低表达与组织发育和细胞外基质等过程相关基因。软骨祖细胞中转录因子PRRX2、PRRX1、MEOX2、AEBP1、SOX10的转录失调可能导致软骨细胞或其细胞外基质发育障碍,导致小耳畸形的发生。针对软骨细胞的研究中,共鉴定出了9种软骨细胞,包括5个既往发现的类型（效应软骨细胞、肥大前软骨细胞、稳态软骨细胞、纤维软骨细胞、线粒体软骨细胞）和4个首次报道的亚群（C1-C4）,且各亚群比例和功能各不相同。拟时序分析结果共发现2个主要轨迹分支点,其中效应软骨细胞和C4最先分化,C1-C3处于中间阶段,而肥大前软骨细胞、稳态软骨细胞和纤维软骨细胞最后分化。病例组软骨细胞多分布于轨迹1中,而对照组细胞多分布于轨迹2中。通过对疾病的差异表达基因进行功能分析发现,效应软骨细胞、肥大前软骨细胞、稳态软骨细胞和纤维软骨细胞在病例组和对照组中存在明显差异,且基因SPARC、ELN、COL2A1、IL6、COL1A1、COL1A2、CXCL2、COL3A1、LUM、CXCL12等作为关键基因其表达量也存在较大差异。提示双侧耳廓的差异发育可能在胚胎发育过程中与上述细胞群数目或基因表达的时空改变有关,并且通过相应信号通路引起软骨发育失调,在畸形发生过程中起主要作用。结论本研宄成功建立了小耳畸形患者耳软骨的单细胞转录组图谱,构建了软骨细胞分化谱系。提示双侧耳廓差异发育主要与软骨祖细胞、效应软骨细胞、肥大前软骨细胞、稳态软骨细胞和纤维软骨细胞的细胞数目和基因时空表达改变有关,并且通过多个与细胞代谢增殖、炎症反应、细胞外基质组成等信号通路引起软骨发育失调导致小耳畸形的发生。本研宄也证明,从单个细胞水平对小耳畸形发病机制进行研究可行。研究目的小耳畸形是一种比较常见的颅面部先天性疾病,其发生与多种遗传和环境因素相关,且二者间交互影响也可能发挥作用。本研究以单纯、非综合征型小耳畸形患者为研究对象,探讨其流行病学特征及可能存在的危险因素,建立能预测重度小耳畸形发生风险的列线图模型。研究方法回顾性分析2014年7月至2019年7月就诊于中国医学科学院整形外科医院的先天性小耳畸形患者的临床数据,进行流行病学分析。结合国内外参考文献和临床经验,设计有关父母围孕期危险因素的调查问卷,收集人口学资料和各个危险因素的暴露情况。应用卡方检验和Fisher精确检验对各变量进行单因素分析,随后将差异有统计学意义的变量纳入多因素Logistic回归模型,分析与重度患者相关的独立危险因素,构建列线图模型。采用C指数、校准曲线和受试者工作特征曲线评估模型性能。研究结果本研究共纳入965例患者,其中男性629例（65.2%）,散发病例867例（89.8%）。单侧发病多见（83.1%）且多为右侧受累（52.0%）。392例（40.6%）为非单纯性病例。多因素分析提示,母亲生育年龄、流产频次、孕期病毒感染、贫血、使用黄体酮、父亲饮酒史和父母居住地地形与重度小耳畸形有关。将上述变量引入列线图后,C指数=0.755（95%CI=0.703-0.807）,bootstrap内验证后校正C指数=0.749;校准曲线显示与标准曲线贴合良好;ROC曲线下面积为0.755,提示此模型的敏感性和特异性较好。结论先天性小耳畸形多为男性患病,且以右侧和散发病例为主。基于父母围孕期多种危险因素构建的预测重度小耳畸形的列线图模型,具有较好的准确度和区分度,可为临床个性化预防提供指导。