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背景:Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)被认为是胃肠道起搏细胞,能够产生慢波电位,可以介导神经冲动传递和调节胃肠道平滑肌收缩等功能,在胃肠道动力障碍性疾病发生过程中起非常重要的作用。近年来研究发现,在胆道系统中,如胆囊、胆管、Oddi括约肌,同样也有Cajal间质细胞的存在,也能够产生自主慢波节律电位,调节胆囊的收缩性活动。急性胆囊炎(Acute cholecystitis)是消化内科临床中常见的疾病,病因较多,如化学性刺激、胆道梗阻或细菌感染等。近年来研究发现,炎症反应发生时,将会导致Cajal间质细胞的数目、功能、形态学和超微结构发生改变,最终影响胃肠道的动力功能。因此,本文通过研究在急性胆囊炎时,Cajal间质细胞在胆囊中的形态、分布和功能,观察Cajal间质细胞与胆道系统动力之间的关系,拓宽对Cajal间质细胞功能的认识,有助于阐明Cajal间质细胞在胆道系统动力障碍性疾病发病过程中的机制,为今后临床的诊断和治疗提供新的方法。目的:1.通过胆总管结扎方法构建急性胆囊炎动物模型,观察胆囊组织发生炎症反应时的病理改变;2.观察处于不同炎症时期的Cajal间质细胞的形态和分布情况;3.在急性胆囊炎豚鼠模型中,Cajal间质细胞处于炎症不同时期时,比较它们的形态和分布与正常胆囊Cajal间质细胞有无差异,以及其在胆囊底、体、颈各部位的分布有无差异;4.研究中性粒细胞对Cajal间质细胞的SCF和c-kit表达情况以及凋亡情况;5.探讨Cajal间质细胞在胆道系统动力障碍性疾病发病过程中的相关机制。材料和方法:1.健康成年豚鼠各30只,随机分为正常组、胆总管结扎24h和48h组,通过胆总管结扎方法构建急性胆囊炎动物模型;2.从出生10-14天的豚鼠中提取胆囊Cajal间质细胞,与正常组、胆总管结扎24h和48h组中的胆囊外周血中性粒细胞进行共培养分成4组,分别是单培养组、共培养1组、共培养2组以及共培养3组。3.收集每组胆囊组织和Cajal细胞,采用HE染色、免疫荧光染色技术观察胆囊炎症程度和Cajal间质细胞分布情况;4.采用Western Blotting、Rt-PCR、TUNEL技术分别观察Cajal间质细胞c-kit及SCF的蛋白和mRNA的表达情况,以及其凋亡情况。结果:1.HE染色后,正常组胆囊未见炎性改变,胆总管结扎24h组可见炎症较轻,胆总管结扎48h组可见明显炎性改变;2.在单培养组和共培养1组中,胆囊Cajal间质细胞没有明显的形态学变化。相反,在共培养2组和共培养3组中,胆囊Cajal间质细胞突触变短,相互之间的连接减少,网络结构也遭到破坏。另外,在共培养3组中的胆囊Cajal间质细胞的形态学变化明显大于在共培养2组中的胆囊Cajal间质细胞。3.急性炎症时,Cajal间质细胞数量减少,胆囊正常组、胆总管结扎24h组及48h组数量分别为 61.6667±2.08167、54.0000±1.73205、38.3333±1.52753,差异具有统计学意义(P<0.001);各组胆囊Cajal间质细胞的数量从胆囊底到胆囊颈逐渐增加,但随炎症程度发展数量均有减少,正常组胆囊颈、胆囊体、胆囊底Cajal间质细胞数量分别为 70.0000±2.00000、60.6667±3.78594、53.6667±4.04145,胆总管结扎 24h 组分别为 60.3333±2.51661、55.0000±1.00000、46.6667±3.51188,48h 组分别为 50.3333±1.52753、39.0000± 1.00000、25.6667±3.05505,差异具有统计学意义(P<0.05);4.在共培养组中,SCF和c-kit蛋白的表达水平明显低于单培养组(见图11、12);同时,SCF和c-kit蛋白的表达水平在共培养3组中最低,具有统计学差异(P<0.05);同时,c-kit与β-actin的比值在单培养组、共培养1组、共培养2组和共培养 3 组中分别是 0.5943 ± 0.07095,0.5503 ± 0.03109,0.3363 ± 0.04712,and 0.2327 ±0.04974,具有统计学差异(F= 33.360,P = 0.000);5.与共培养3组相比,SCF和c-kit mRNA的表达水平明显低于其它组。与单培养组相比,在共培养1组和共培养3组中,SCF mRNA的表达水平为1.0000 ±0.00000 vs.0.9673 ± 0.02887 vs.0.6630 ± 0.07119 vs.0.4350 ± 0.14584;c-kit mRNA的表达水平是 1.0000 ± 0.0000 vs.0.9570 ± 0.02961 vs.0.7130 ± 0.05839.0.4287±0.10130,具有统计学差异(F= 31.721 和 57.006,P 值均=0.000);6.在共培养组中,胆囊Cajal间质细胞发生凋亡的密度明显高于单培养组。另外,共培养1组中Cajal间质细胞发生凋亡的密度高于单培养组;共培养3组中Cajal间质细胞发生凋亡的密度野高于共培养2组,具有统计学差异(1.0000 ±0.00000 vs.1.6667 ± 0.57735 vs.5.3333 ± 0.57735vs.10.6667 ± 0.57735,F = 192.889,P =0.000)。7.结论:1.胆囊Cajal间质细胞数量、分布及形态学的改变,可能在急性胆囊炎发病机制起某种作用;2.胆囊Cajal间质细胞在调节胆囊动力功能的机制起非常重要的作用,可能参与胆道动力障碍性疾病的发病过程。