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目的:本研究以安徽省扬子鳄（Alligator sinensis）繁殖研究中心提供扬子鳄眼球为研究对象,通过免疫组织化学染色和免疫荧光染色分析并观察一氧化氮合酶（NOS）和脑源性神经营养因子（BDNF）在扬子鳄眼球中的表达及分布情况,从而为后续探讨BDNF和NOS在扬子鳄视觉形成中的作用提供实验基础。方法:查询NCBI GenBank公共数据库中的人（accession no:NP000616.3）、家兔（accession no:AAB68663.1）、非洲爪蟾（accession no:AAD55136.2）、斑马鱼（accession no:NP571735.1）的NOS和以及人（accession no:CAA62632.1）,家兔（accession no:XP017201122.1）,非洲爪蟾（accession no:AAH82887.1）,斑马鱼（accession no:AAH66468.1）的BDNF蛋白氨基酸序列,利用MEGA软件对NOS和BDNF的氨基酸序列进行序列同源性比对和分析。取新鲜的鳄鱼眼球并立即用4%多聚甲醛固定,剔除周围的结缔组织,OCT包埋后进行冰冻切片,切片厚度为6μm。将切片在室温晾置20 min后,PBST漂洗三次,每次10 min,在组织周围用免疫组化笔画圈后滴加H2O2封闭30 min,然后滴加一抗（稀释比例分别为兔抗BDNF抗体为1:200,鼠抗nNOS抗体为1:200）,置于湿盒内于4℃孵育过夜。次日将片子取出,PBST洗3次,每次10min。分别滴加HRP标记的羊抗兔IgG抗体和HRP标记的兔抗鼠IgG抗体,室温孵育1小时,PBST洗3次,每次10min,DAB显色液显色后,光镜下观察BDNF和nNOS在眼球中的表达;HE染色观察成年扬子鳄眼球切片的结构。将新鲜的鳄鱼眼球取出后立即用4%多聚甲醛固定,将周围结缔组织清除干净,OCT包埋后进行冰冻切片,切片厚度为6μm。将切片在室温晾置20 min后,PBST洗三次,每次10 min,在组织周围用免疫组化笔画圈后滴加入5%马血清封闭30 min后,分别滴加兔抗BDNF抗体（稀释比列为1:200）和鼠抗nNOS抗体（稀释比列为1:200）后,置于湿盒内于4℃冰箱孵育过夜。次日将片子取出,PBST洗3次,每次10min。滴加二抗（同时加入驴抗小鼠-594,驴抗兔-488,稀释比例均为1:1000）,室温孵育2小时后,PBST洗3次,每次10min。滴加DAPI（1:1000）染核10 min后,PBST洗10min。甘油封片后于激光共聚焦显微镜拍照,观察NOS、BDNF在眼球中的分布情况。结果:通过生物学分析发现NOS和BDNF蛋白氨基酸序列在不同物种之间存在差异性,NOS蛋白氨基酸序列中,家兔和非洲爪蟾的同源性最高,为76.70%,其次为非洲爪蟾与斑马鱼的同源性74.02%;BDNF蛋白氨基酸序列中,人和非洲爪蟾的同源性最高,为85.48%,其次为人和家兔的同源性72.95%。HE染色可观察到扬子鳄眼球巩膜、脉络膜、视网膜结构清晰。免疫组织化学染色明显发现BDNF在扬子鳄眼球切片的脉络膜层和视网膜层表达,而NOS主要在视网膜层表达。免疫荧光染色发现BDNF和NOS在视网膜层共同表达,二者在视网膜层出现共存现象。结论:1.BDNF在扬子鳄眼球切片的脉络膜层和视网膜层表达,而NOS主要在视网膜层表达,二者在视网膜层共同表达并出现共存现象。2.BDNF和NOS在扬子鳄的眼球中均有表达且共存,可能参与扬子鳄视觉形成的调节。