本实验建立了一种同时检测5种猪病毒性繁殖障碍病原体的多重PCR方法。采用Primer Premier 5.0和Oligo 6.0引物设计软件根据GenBank中已发表的PPV的NS1基因、PCV2的ORF2、JEV的NS1基因、PRRSV的M基因以及PRV的gE基因序列设计了5对引物；分别扩增长度为750bp、494bp、475bp、363bp、178bp的特异性片段。通过对影响PCR的几个主要因素(包括反应Buffer、反应的退火温度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、Mg²⁺浓度等)进行优化，建立了灵敏检测这5种疾病的单项PCR方法；同时，还以PCV2为例就不同DNA抽提方法对扩增效率的影响进行了比较研究，通过比较确定了最佳的模板DNA抽提方法；对多联PCR反应中的Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度和Mg²⁺浓度等进行优化后，建立了在相同反应程序下通过二联和三联两个反应体系（PPV-JEV，PCV2-PRRSV-PRV）对这5个核酸片段进行有效扩增的多重PCR方法。敏感性实验表明二联PCR最低检测限为：40.7TCID₅₀PPV，15.5TCID₅₀JEV；三联PCR最低检测限为：389TCID₅₀PRRSV、245TCID₅₀PRV，最低也能检测到经10^-4稀释的PCV2抽提的DNA。实验表明该方法能够对PRV的野毒株和gE基因缺失疫苗株进行鉴别，同时能够区别PCV1和PCV2的感染；对PRV-SA215株、PCV1的核酸和健康猪淋巴结核酸抽提物均不能扩增出任何条带。利用该方法对采自四川、重庆、广西、广东、福建等发病猪场的30个病料进行了检测，检测结果再与单项PCR方法检测结果相比较，两者平均阳性符合率为93.3％。表明该方法是一种高度敏感、特异的检测方法，可以运用于临床诊断。