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第一部分AP-1家族蛋白在牙源性角化囊肿上皮细胞增殖中的作用研究目的:AP-1家族蛋白是重要的体内转录因子,由Jun蛋白家族（Jun,Jun-B,Jun-D）、Fos蛋白家族（Fos,Fos B,Fra-1,Fra-2）、ATF蛋白家族（ATF-α,ATF-2,ATF-3）及JDP蛋白家族（JDP-1,JDP-2）组成。近年研究发现AP-1家族蛋白参与细胞的增殖、凋亡和分化等重要过程。本部分拟研究AP-1家族蛋白在牙源性角化囊肿中的表达及其与上皮细胞增殖的关系。方法:收集10例正常口腔黏膜组织、10例含牙囊肿组织和32例牙源性角化囊肿组织标本用免疫组织化学染色,检测Fra-1、c-Jun、c-Fos、Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白的表达水平,运用免疫荧光染色和聚类分析的方法检测Fra-1、c-Jun和c-Fos蛋白与细胞增殖和抗凋亡指标的相关性。结果:牙源性角化囊肿上皮组织中的AP-1家族蛋白表达水平明显升高并与Ki-67和PCNA蛋白的表达呈显著相关。在牙源性角化囊肿上皮细胞中可见Fra-1、c-Jun和c-Fos蛋白与Ki-67和PCNA蛋白明显共表达。结论:牙源性角化囊肿上皮细胞中过表达AP-1家族蛋白,可能与其较高增殖活性有关。第二部分牙源性角化囊肿囊液细胞源性微囊泡研究目的:颌骨囊性病变囊液是具有较高渗透压的液体,其内含有大量的蛋白质、脂质和RNA。囊肿上皮细胞及间质中的成纤维细胞和炎症细胞等可释放角化物、细胞因子等至囊液。细胞源性微囊泡大量存在于包括血液、唾液、尿液等体液中,并在正常生理过程及肿瘤发生发展中有重要作用。然而,细胞源性微囊泡在颌骨囊肿囊液中的水平,表面抗原特性及其作用尚不清楚,本部分拟探讨牙源性角化囊肿囊液中微囊泡的生物学特征。方法:收集26例牙源性角化囊肿、20例根尖囊肿和13例含牙囊肿的囊液样本,采用差速梯度离心法分离和纯化微囊泡,使用透射电子显微镜、流式细胞术、免疫印迹实验以及荧光显微镜鉴定囊液中细胞源性微囊泡,并使用流式细胞术对囊液细胞源性微囊泡进行表面抗原分析和定量分析。采用激光共聚焦显微镜观察上皮细胞及单核巨噬细胞对囊液微囊泡的摄取作用,并采用RT-PCR和TRAP染色的方法检测囊液微囊泡的生物学功能。结果:研究表明牙源性角化囊肿囊液的微囊泡浓度较含牙囊肿及根尖囊肿明显升高。囊液微囊泡具有上皮细胞、血管内皮细胞及血小板等广泛的细胞来源。体外实验表明囊液微囊泡继承性携带囊肿组织中的表面抗原RANKL,可被正常口腔黏膜上皮细胞和骨髓单核巨噬细胞摄取,并能促进破骨细胞的生成。结论:牙源性角化囊肿囊液中的细胞源性微囊泡数目升高并可携带RANKL蛋白促进破骨细胞生成,细胞源性微囊泡是颌骨囊性病变进展的重要信息载体。第三部分牙源性角化囊肿囊液淋巴细胞源性微囊泡研究目的:最近研究表明淋巴细胞源性微囊泡是淋巴细胞发挥功能的重要信使,与多种疾病的发展密切相关。伴发感染的颌骨囊性病变中常发现淋巴细胞浸润,本部分研究旨在评估囊液淋巴细胞源性微囊泡在牙源性角化囊肿中的生物学功能。方法:收集23例牙源性角化囊肿（20例伴发局部感染,3例未感染）,15例根尖囊肿和12例伴感染的含牙囊肿囊液微囊泡,比较淋巴细胞源性微囊泡表达差异。收集Jurkat细胞源性微囊泡,采用Bio-Plex悬液芯片技术检测Jurkat细胞微囊泡及其上清中的细胞因子的表达水平。Jurkat细胞微囊泡或Jurkat细胞分别与牙源性角化囊肿成纤维细胞共培养,RT-PCR和ELISA检测成纤维细胞中RANKL和MMP9的m RNA表达及成纤维细胞上清中的RANKL的变化。收集牙源性角化囊肿成纤维细胞上清与Jurkat细胞微囊泡处理的成纤维细胞上清,分别与破骨前体细胞系Raw264.7细胞间接共培养,TRAP染色观察和统计破骨细胞形成的数目。结果:伴发感染的牙源性角化囊肿囊液中淋巴细胞微囊泡比例明显升高。IL-15在Jurkat细胞源性微囊泡中浓度明显升高并可促进牙源性角化囊肿成纤维细胞RANKL表达,使间接共培养体系中成熟的破骨细胞数目增多。结论:淋巴细胞可通过释放微囊泡携带IL-15促进成纤维细胞RANKL表达,从而促进牙源性角化囊肿中破骨细胞生成。