现阶段,治疗无乳链球菌导致的奶牛乳腺炎的首要方法仍是注射抗生素药物。但是随着抗生素的滥用,无乳链球菌生物被膜逐渐对抗生素产生耐药性。因此,寻求其他药物来代替抗生素或者用其他药物与抗生素联合治疗生物被膜感染的新思路逐渐受到相关学者的关注。茶皂素提取于山茶植物中,其价格便宜,来源广泛,几乎不具有毒副作用,具有较高的研究价值。但是,关于茶皂素抑制无乳链球菌生物被膜形成的机制研究却鲜有报道,本文以此为切入点进行了研究,实验方法及结果如下:1、对奶牛源无乳链球菌分离株进行了荚膜多糖血清型鉴定,并对该株无乳链球菌体外形成生物被膜条件进行了优化研究。结果表明该株无乳链球菌血清型为Ⅲ型;并且在TSB培养基中,培养48 h、葡萄糖浓度和NaC1浓度均为1.0%、pH为7.0、牛奶浓度为1.5%时可形成致密的生物被膜。2、研究茶皂素对无乳链球菌生物被膜形成的影响,利用生长曲线实验测试茶皂素对无乳链球菌菌株生长的影响,通过扫描电子显微镜(SEM)观察茶皂素作用下生物被膜形态变化。最终得出以下结论.:随着茶皂素浓度的提高,生物被膜被抑制的愈加明显;茶皂素不影响达到稳定期时的菌落总数;SEM结果显示,实验组菌体变小,数目减少,形成的生物被膜稀疏。说明茶皂素能够明显抑制生物被膜的形成。3、本研究将分离自同一患病奶牛的三株菌(无乳链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)共同培养形成复合菌群,研究茶皂素对复合菌群生物被膜的影响,并通过SEM观察茶皂素对复合生物被膜的影响。结果显示复合菌能够在低浓度茶皂素环境下形成较为致密的生物被膜,但是随着茶皂素浓度的提高,复合菌群对茶皂素的耐受性逐渐降低;SEM观察结果也呈现类似效果,所以高浓度茶皂素仍可以明显抑制复合菌群所形成的生物被膜。4、通过PCR技术扩增与无乳链球菌生物被膜相关的基因,利用荧光定量PCR实验检测茶皂素对生物被膜相关基因的转录影响。最终,luxS和neuA基因的转录水平无明显变化,cpsE和srtA转录水平分别被下调了 73%和50%,csrR作为生物被膜负调控基因被上调了 3 7.8%。5、检测茶皂素对无乳链球菌生物被膜eDNA释放的影响,并利用硫酸蒽酮法检测茶皂素对无乳链球菌生物被膜胞外多糖的影响。结果表明:茶皂素对水溶性及水不溶性胞外多糖的合成都起到抑制作用;茶皂素对无乳链球菌eDNA释放的影响随着其浓度的增加而逐渐增强,抑制eDNA趋势表现为浓度依赖性。