坏死杆菌（Fusobacterium necrophorum）是一种革兰氏阴性非芽孢专性厌氧多形性细菌,是人类和动物消化道的常在菌。坏死杆菌的发病机制中最重要的因素之一是细菌与宿主细胞的黏附。细菌与宿主细胞的黏附有助于它寄居于宿主组织细胞上,进而在细胞内繁殖并扩散到其他组织。虽然已有研究表明牛坏死杆菌43 kDa外膜蛋白（Outer membrane protein,OMP）能与仓鼠肾细胞、牛子宫内膜细胞及牛乳腺上皮细胞黏附,但具体是宿主细胞的哪种蛋白或哪一系列蛋白能与之作用还不清楚,因此本试验对牛坏死杆菌43 kDa OMP与BHK-21细胞的相互作用蛋白进行了初步筛选。本试验构建了pCAGGS-43 kDa OMP的真核表达载体,经鉴定后转化至大肠杆菌细胞中进行质粒提取,将提取的重组质粒转染至BHK-21细胞进行瞬时表达,之后制备牛坏死杆菌43 kDa OMP的单克隆抗体,采用间接ELISA方法测定单克隆抗体的效价,并进行亚型鉴定、Western blot鉴定及间接免疫荧光鉴定,最后利用制备好的43 kDa OMP的单克隆抗体通过免疫共沉淀初步筛选牛坏死杆菌43 kDa OMP与BHK-21细胞相互作用的蛋白。结果如下:（1）牛坏死杆菌43 kDa OMP在BHK-21细胞中瞬时表达;（2）成功制备了1株牛坏死杆菌43 kDa OMP单克隆抗体并命名为O₄₃;（3）通过免疫共沉淀方法初步筛选出的差异性条带,进行质谱分析结果检测出70个疑似差异蛋白。本试验初步筛选牛坏死杆菌43 kDa OMP与BHK-21细胞相互作用的蛋白,为探讨牛坏死杆菌43 kDa OMP与牛宿主细胞相互作用的蛋白提供理论依据,对深入研究坏死杆菌的发病机制提供了更多的参考,对牛坏死杆菌的抗菌药物设计研究提供新的理论基础。