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骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic proteins-7,BMP-7),又称OP-7,属于TGF-β家族,在调控牙根发育及修复性牙本质形成方面具有重要的作用,但其半衰期短特异性差,体内易被稀释代谢而失活。本课题通过体外分离、培养和鉴定人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)和根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAP),采用复乳-溶剂蒸发技术制备PHBV-BMP-7缓释微球,分析微球的缓释作用及对两种细胞增殖分化的影响,从而为探讨BMP-7缓释微球与干细胞相结合在牙根闭合,牙根损伤修复及牙根再生中的可能作用和应用,提供参考依据,结果如下。一、牙周膜干细胞和根尖牙乳头干细胞的分离、培养和鉴定收集临床上健康的根尖未发育完成的阻生齿、前磨牙或多生牙,采用酶消化培养法分离得到人PDLSCs和SCAP,克隆化分离培养;观察两种细胞的生长状态,抗体标记检测细胞表型,进行细胞鉴定。结果:细胞生长状态良好,增殖快,SCAP原代细胞的生长速度较PDLSCs慢,呈集落样生长;免疫组化染色显示两种细胞STRO-1和波形丝蛋白阳性表达,角蛋白阴性表达,茜素红矿化结节染色阳性。二、PHBV-BM-7缓释微球的制备及相关检测采用复乳-溶剂蒸发技术制备PHBV-BMP-7载药微球,电镜下观察微球的形态粒径,通过ELISA法检测微球的释药率及体外56天内的释药百分数,并收集1d,3d,7d,14d,28d,56d微球释放液;结果:微球形态圆整均匀,粒径范围较窄,平均粒径为50μm±12μm,跨距=0.7,载药率为0.67%±0.27%,微球中的BMP-7释放符合双相动力学释药规律,1d内的释放百分数为17.22%±0.94%,呈突释性释放,累计释放量不断增加,至56天时达到52.75%±4.67%。三、PHBV-rhBMP-7微球对PDLSCs和SCAP增殖和分化的影响选择第4~6代生长良好的PDLSCs和SCAP,分别用PHBV-BMP-7微球和PHBV空载微球不同时期的释放液培养,用MTT法测定缓释的rhBMP-7对细胞增殖的影响,通过检测细胞碱性磷酸酶活性观察其对细胞分化的影响。结果:各时间点的PHBV-BMP-7微球释放液均可促进PDLSCs和SCAP的增值和分化,促进作用随释放时间延长而增强,且14d后的各时间点均与7d内各时间点有显著差异(P<0.05),与PHBV空载微球各相应时间点释放液和空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);空载微球与对照组相比,细胞增殖和ALP活性无显著性差异(P>0.05)。PHBV-BMP-7缓释微球释放的BMP-7对PDLSCs细胞增殖影响稍大于SCAP,但差异不明显(P>0.05),但对SCAP的ALP活性影响要明显强于对PDLSCs的作用(P<0.05)。