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瘦素(Leptin)和缩胆囊素(Cholecystokinin,CCK)在哺乳动物中已被证实是一类能抑制食欲的细胞因子,但其在硬骨鱼类中的许多生物功能仍不明确。为探究瘦素和缩胆囊素在布氏鲳鲹中参与摄食调控的作用机制,本研究利用同源克隆结合RACE的方法首次在布氏鲳鲹中分离了 Leptin-B/LeptinR/CCK三个摄食相关的功能基因,比较分析了其同源性和系统进化关系,并通过实时荧光定量技术检测了 Leptin/LeptinR/CCK在各器官组织的表达分布情况,同时对下丘脑和肝脏中的Leptin/CCK在餐前餐后和饥饿复投过程的mRNA表达水平进行了定量分析,取得了以下实验成果:1.分离了布氏鲳鲹Leptin-B/LeptinR/CCK三个摄食相关的功能基因,其中,Leptin-B cDNA全长序列为1223bp,共编码158个氨基酸;LeptinRcDNA全长序列为3809bp,共编码1158个氨基酸;CCK cDNA全长序列为822bp,共编码137个氨基酸。进一步分析其推导的氨基酸序列,发现Leptin-B在初级结构上与其他脊椎动物存在差异,但三级结构也存在四个保守的α螺旋环;LeptinR前体N端含有一段26个AA组成的信号肽,也存在其他脊椎动物保守的功能结构域,包括3个Ⅲ型纤连蛋白结构域、1个免疫球蛋白C2样结构域、1对WSXWS基序、2个JAK2框和1个STAT框以及Leptin配体结合域;CCK前体由20个AA组成的信号肽和117个AA组成的成熟肽构成,包括C端一段CCK-8肽(DYL GWMDF)。同源性比较和进化树分析表明,Leptin-A和Leptin-B的氨基酸相似度仅为24.7%,两种Leptin亚型各自聚成单独一枝;LeptinR和CCK与同属鲈形目鱼类的氨基酸同源性较高,并且单独聚为一枝。2.实时荧光定量检测结果显示,Leptin-A和Leptin-B在布氏鲳鲹各个组织中广泛表达,并且Leptin-A在肝脏、脂肪和各个脑区中丰富表达,在肾脏中表达量最少。Leptin-B则在脂肪、心脏、脾脏等组织丰富表达,但在肌肉和肾脏中微量表达。LeptinR在垂体中表达量最高,其次是肌肉组织,在肝脏、肾脏、脂肪和心脏也有较高的表达量,但在神经组织端脑、小脑和下丘脑中几乎无表达。CCK主要在布氏鲳鲹端脑、垂体、肌肉等组织中表达,在脂肪、鳃、肾脏等外周组织低表达。3.餐前餐后实验中,布氏鲳鲹肝脏中Leptin-A和下丘脑中Leptin-B的表达变化规律都表现为餐前3h逐渐下降,但餐后1h又逐渐上升并在+3h达到对照组水平。而下丘脑中Leptin-A的表达量在餐前-3h和0h都略高于餐后组,餐后组在+1h和+3h也分别略低于对照组。肝脏中Leptin-B和LeptinR的表达量在餐前-3h、-1h和0h都高于餐后组,餐后+1h略低于对照组,餐后+3h与对照组相当。下丘脑中LeptinR的表达量在餐前餐后不存在显著差异。下丘脑中CCK的表达量在餐前逐渐上升,摄食后又下降到正常水平。以上结果表明leptin可能是布氏鲳鲹餐后饱腹信号因子,而CCK则不然。4.饥饿复投实验中,布氏鲳鲹下丘脑和肝脏中Leptin-A/B的表达量在禁食阶段都显著上升,复投喂之后都又重新下降至对照组水平。下丘脑中LeptinR的表达量在禁食阶段显著低于对照组水平,肝脏中LeptinR的表达量则略低于对照组,但复投喂之后在第7天都上升至对照组水平。而下丘脑中CCK的mRNA水平在禁食阶段下降,复投喂后又重新上升至对照组水平。以上结果显示,饥饿会引起布氏鲳鲹中的Leptin/LeptinR/CCK mRNA水平显著变化,证实了 Leptin和CCK可能参与了布氏鲳鲹摄食调控。