利用植物油体表达血管内皮生长因子的研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:gaga1235
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转基因植物在近来的生物学研究中的地位越来越重要,它广泛应用于农业领域,主要应用在品种改良、抗性筛选等多个方面。通过转基因植物生产具有特殊功能的医药用蛋白,已经逐渐映入人们的视野中,成为转基因植物研究的热点。它在实际应用生产中,具有很多优势。首先利用植物生产系统可以大规模的生产外源重组蛋白,使其降低成本;其次植物系统生产的外源重组蛋白,安全有效,不含对人体具有危害的动物病毒和致病微生物,相对比较安全;另外,植物的转基因技术比较成熟;最后贮藏在植物果实、种子中的外源重组蛋白利于运输,并且可以长时间储存;这为利用植物生产药用蛋白(植物生物反应器)提供了广阔的应用前景。血管内皮生长因子对血管生长再生起着特殊的作用。随着研究的深入,有关VEGF的应用价值在临床上有了更多的体现。目前,VEGF在临床上应用越来越广泛,它的需求量不断增大。为了满足市场对VEGF的大量需求,本实验选用拟南芥和红花生产重组蛋白VEGF,以期获得高表达VEGF的转基因植株和种子。为进一步利用植物生物反应器生产重组蛋白奠定基础。通过对拟南芥和红花表达VEGF的研究,得到如下结论:1.成功构建了植物油体表达载体pOTB-VEGF。本实验通过基因工程基本操作,包括PCR克隆、酶切连接转化等技术,将构建成功的重组质粒转入农杆菌EHA105中,获得了植物转化用工程菌。2.成功收获8株转基因拟南芥株系。利用Flora-Dip法转化拟南芥,经1%basta筛选,获得转有VEGF的转基因拟南芥株系。3.分别利用孟德尔遗传规律和SDS-PAGE和Western对转基因拟南芥种子进行分析与检测,结果证明融合蛋白Oleosin-VEGF在拟南芥种子中表达。4.选用新疆裕民无刺红花为植物材料,初步建立了红花的高效再生体系。5.利用农杆菌介导方法,对红花进行遗传转化,将转化植株在含有选择抗性Basta的培养基上培养,筛选出转化植株。6.对转基因红花进分子检测:将植物表达载体pOTB-VEGF的T-DNA区转入到红花的基因组中,PCR检测结果显示VEGF基因已经成功整合到红花基因组。
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