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背景和目的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的持续感染是部分慢性胃炎、消化性溃疡、低度恶性胃黏膜相关淋巴样组织(mucosa-associated lymphoid tissue, MALT)淋巴瘤明确的病因之一,同时它也可能是胃癌发生的启动因素。1994年,WHO将H. pylori列为“一级致癌因子”。尽管如此,幽门螺杆菌持续感染导致胃癌发生的机制尚不明确。贲门的组织细胞结构和pH环境均与远端胃有所不同,贲门黏膜幽门螺杆菌的感染状况、细菌定植密度以及贲门癌(cardiac carcinoma,CC)的发生与幽门螺杆菌持续感染的关系还有待更深入的研究,尤其针对潮汕地区这一食管癌-贲门癌高发区高危人群的研究很缺乏。本研究通过HE染色确认贲门黏膜的病理诊断符合本研究标本录用标准,并判断慢性炎症程度,选用改良水浴加热Giemsa染色法和免疫组化染色法来研究潮汕地区贲门癌高危人群幽门螺杆菌的感染状况,并对细菌密度进行分级,继而使用免疫组化染色法观察贲门黏膜上皮细胞Ki-67的表达水平,探讨幽门螺杆菌感染、细菌密度与贲门黏膜的慢性炎症和上皮细胞增生程度的关系,进而为研究幽门螺杆菌与贲门癌发生发展的关系提供一定的依据。材料和方法材料334例非食管癌、贲门或胃癌患者贲门组织石蜡标本分两组:1.有症状就医患者:2007～2010年间汕头大学医学院病理学教研室标本库:男62例,女21例;2009-03～2009-09间汕头大学医学院附属肿瘤医院胃镜室:男21例,女14例;2007～2010年间汕头大学医学院第一附属医院病理科标本库:男82例,女34例。2.食管癌-贲门癌高危人群普查受试者:2009-11～2010-03间揭阳市人民医院病理科标本库:男59例,女41例。方法1.苏木素-伊红染色(Hematoxylin and eosin stain)确认每例标本的病理诊断为贲门非恶性肿瘤(正常、慢性炎症、慢性炎症伴萎缩、慢性炎症伴异型增生),并根据单个核细胞浸润的密度和深度进行慢性炎症程度分级。2.Giemsa染色法改良水浴加热Giemsa染色法(约58℃)浸染贲门组织切片。3.免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色Envision Labelled Peroxidase System(ELPS)二步法标记贲门黏膜及黏液中的幽门螺杆菌(H. pylori)、检测Ki-67蛋白在贲门黏膜组织中的表达。4.图像分析法应用Leica IM50图像采集系统和Image-Pro Plus 6.0图像分析系统对染色结果分析,计算每张切片Ki-67的阳性标记指数( labelling index ,L I)。结果1.幽门螺杆菌流行病学特点:总感染率为76.95%(257/334),其中有症状就医患者感染率为81.20%(190/234),高于食管癌-贲门癌高危人群普查受试者的感染率67.00%(67/100),且两类人群间感染率差异有高度统计学意义(P<0.01)。各年龄组间(<20、20～29、30～39、40～49、50～59、60～69、70～79和≥80岁)以及按性别(男:75.00% ,168/224;女:80.91%,89/110)分组,感染率差异均没有统计学意义(P>0.05)。2.幽门螺杆菌感染与贲门黏膜局部慢性炎症和Ki-67表达水平间的关系:慢性炎症与H. pylori感染密切相关(P<0.01),但Ki-67表达与H. pylori感染不相关(P>0.05);H. pylori密度级别越高,相应贲门黏膜局部慢性炎症程度越重、Ki-67表达水平也越高(P<0.01)。3.三种病理类型组间H. pylori感染率和定植密度的评价:正常和慢性炎症、慢性炎症伴异型增生、慢性炎症伴萎缩三组病理类型间H. pylori感染率和定植密度差异有统计学意义(P<0.05),且各组受试者H. pylori感染率和定植密度逐渐增高。结论1.潮汕地区贲门癌高危人群幽门螺杆菌感染率远高于全国自然人群的平均水平(59%),其中有症状就医患者感染率高于无症状普查人群。2.幽门螺杆菌感染与贲门黏膜的慢性炎症密切相关,且细菌定植密度越高贲门慢性炎症程度越重。3.正常和慢性炎症、慢性炎症伴异型增生、慢性炎症伴萎缩各组幽门螺杆菌感染率及细菌定植密度等级逐渐增高。