【摘 要】
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研究目的:利用生物信息学技术对GEO数据库中NK/T细胞淋巴瘤（NK/T cell lymphoma,NKTCL）测序数据进行处理,筛选出差异表达基因以及探索其可能影响的信号通路;分析靶基因表达与患者临床病理特征之间的关系,评估筛选CCND1作为治疗靶点的临床价值;构建体外放化疗细胞模型,探索靶向CCND1对NKTCL细胞生长的影响,为后续进一步研究NKTCL的治疗策略提供依据。研究方法:（1）收
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研究目的:利用生物信息学技术对GEO数据库中NK/T细胞淋巴瘤（NK/T cell lymphoma,NKTCL）测序数据进行处理,筛选出差异表达基因以及探索其可能影响的信号通路;分析靶基因表达与患者临床病理特征之间的关系,评估筛选CCND1作为治疗靶点的临床价值;构建体外放化疗细胞模型,探索靶向CCND1对NKTCL细胞生长的影响,为后续进一步研究NKTCL的治疗策略提供依据。研究方法:（1）收集GEO数据库GSE19067、GSE80632的NKTCL测序数据,使用R软件中“affy”包和“sva”包对数据进行预处理,利用“Limma”包对预处理后的数据进行差异表达基因（different expression gene,DEG）筛选,对DEGs进行GO和KEGG功能富集分析。利用STRING数据库构建蛋白互作网络,通过Cytoscape软件进行可视化展示。（2）收集在某三甲医院病理科确诊为NKTCL的60例患者肿瘤组织样本,利用苏木精—伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）观察肿瘤组织形态变化;免疫组织化学染色技术（immunohistochemistry,IHC）检测CCND1在肿瘤组织中的表达,利用SPSS软件分析CCND1表达与患者临床特征之间的关系。（3）利用CCK-8试剂盒检测NKTCL肿瘤细胞增殖情况;利用q PCR检测CCND1在NKTCL肿瘤细胞中的表达。研究结果:（1）经筛选对两个NKTCL数据集进行分析,与正常组比较,NKTCL样本中有3425个DEGs,其中1793个基因表达升高,1632个基因表达降低。（2）通过GO和KEGG分析,细胞周期相关基因表达和信号通路与正常组比较有显著差异（P＜0.05）;CCND1基因在NKTCL肿瘤样本中明显高表达（P＜0.05）,因此选择CCND1作为待验证靶点。（3）免疫组化结果显示CCND1在NKTCL中呈现阳性表达,同时CCND1的高表达与患者的年龄≥60岁、病变影响骨髓、病变发生远处转移、发病时有B症状、外周血中β2-MG水平异常、诊断分期为晚期以及初治效果差等因素密切相关（P＜0.05）。与性别、原发部位是否为鼻腔、病理指标中Ki-67的水平、EBER、TIA-1、Granzyme B的表达以及外周血中LDH的水平等因素无关（P＞0.05）。（4）经X-射线照射（ionizing radiation,IR）以及使用CCND1抑制剂处理NKTCL细胞,利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,发现NKTCL细胞数显著减少。（5）CCND1在NKTCL肿瘤细胞中高表达,在经过IR和化疗之后CCND1在NKTCL肿瘤细胞中的表达下降。IR和化疗在降低CCND1表达时,二者间存在协同作用。研究结论:（1）利用网络大数据库结合生信分析能有效预测NK/T细胞淋巴瘤的潜在治疗靶点。（2）CCND1基因在NK/T细胞淋巴瘤中表达明显升高,其与患者一些临床特征显著相关。（3）抑制CCND1和/或联合辐射能有效抑制NKTCL细胞生长,故可考虑将CCND1作为NK/T细胞淋巴瘤治疗靶点。
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