海洋生物Ⅱ型胶原蛋白（type Ⅱ collagen，CⅡ）是海洋生物软骨组织的主要构成蛋白，其与皮肤或骨骼中存在的Ⅰ型胶原蛋白在氨基酸构成以及空间结构上有明显的不同，并且结合有Ⅰ型胶原蛋白不存在的构成糖。类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种病因尚未明了的慢性全身性炎症性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，属于自身免疫性疾病。它以关节和滑膜的炎症及软骨和骨的进行性破坏为特征，致残率高。已经有资料显示，鸡或牛的CⅡ通过口服免疫耐受作用达到治疗RA的作用。为此，我们深入探讨了海洋生物来源的CⅡ在治疗RA方面的特性，丰富了CⅡ在其应用领域的功能作用，填补了海洋生物CⅡ的研究空白。第一章从口服免疫耐受对RA的治疗作用和CⅡ在大鼠RA模型中的自我免疫作用两个方面简要介绍了CⅡ在RA治疗中的应用。第二章介绍了CⅡ的分离纯化，分离CⅡ的实验材料是新鲜的蓝鲨（Prionaceglauca）软骨，采用胃蛋白限制性酶解分离法。SDS-PAGE上显示蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白（SCⅡ）是由分子量为130kDa的α1链构成，另外，图谱上无其他杂带，说明提取得到的SCⅡ达到了电泳纯。对SCⅡ常见氨基酸和羟脯氨酸的比例和含量进行了检测。结果表明SCⅡ的甘氨酸残基占氨基酸残基总数的30%以上，并且富含丙氨酸残基和脯氨酸残基，分别占氨基酸残基总量的10.4%和8.8%，由制作的标准曲线推算出SCⅡ羟脯氨酸的含量为7.09%，另外，氨基酸分析过程中并无酪氨酸和色氨酸检出。第三章深入分析了SCⅡ一系列的生物化学特性。分别通过差示扫描量热法、圆二色谱法、紫外扫描法和红外光谱法分析了SCⅡ的热变性温度、二级结构特征、紫外吸收特性和红外光谱特征。差示扫描量热仪的检测结果显示SCⅡ的热变性温度为40.5℃，并通过实验证明了盐浓度和氢离子浓度对其热变性温度有着重要的影响。采用圆二色光谱研究SCⅡ的二级结构特征，计算出了SCⅡ二级结构的组成和比例，并深入探讨了氢离子浓度和保温时间对SCⅡ二级结构组成和比例的影响，发现这二者对SCⅡ的二级结构有着极大的影响。紫外扫描法显示，SCⅡ在260nm处有最大的紫外吸收。红外光谱实验结果显示SCⅡ最主要的吸收带在酰胺带处，包括酰胺Ⅰ(1649-1658cm^-1)、酰胺Ⅱ(1551-1557cm^-1)、酰胺Ⅲ(1239-1245cm^-1)、酰胺A(3407-3425cm^-1)和酰胺B(2932-2961cm^-1)。第四章介绍了在碱性条件下将FITC标记到SCⅡ上，获得了FITC-SCⅡ复合物，并通过SDS-PAGE对标记结果进行验证。荧光及白光成像相结果相对比后发现，FITC成功的标记到了SCⅡ上，且荧光成像结果表明复合物荧光强度较强，说明FITC-SCⅡ复合物结合牢固，性质稳定。第五章介绍的是SCⅡ对CD8+T细胞生长状况的影响。我们将结合成功的FITC-SCⅡ复合物用细胞培养液配制成11.1μg/mL，5.56μg/mL，3.33μg/mL和1.11μg/mL四个浓度梯度，与CD8+T细胞在37℃，5%CO2恒温培养箱中培养24h，培养结束后于荧光倒置显微镜下拍照。结果显示，FITC-SCⅡ复合物与CD8+T细胞表面的特异性受体发生了特异性结合。随后我们又探讨了SCⅡ与CD8+T细胞表面的受体发生特异性结合后对细胞活性和功能的影响，发现CⅡ作为一种营养物质促进了CD8+T细胞的生长，但它同时也可令CD8+T细胞发生僵化作用，激活CD8+T抗原受体信号转导下游通路，产生较多的细胞凋亡因子Fas。第六章通过建立动物模型来验证口服CⅡ产生免疫耐受治疗RA的效果，并探讨其治疗机理。首先，我们按照1mg/Kg/d和3mg/Kg/d的剂量对大鼠灌服CⅡ，并设置空白组、阴性对照组（灌服TWP）和阳性对照组（灌服乙酸），连续灌胃15天后，用0.1ml完全弗氏佐剂（CFA）于实验组右后足垫处注射致炎，在随后的30天内通过大鼠的临床症状表现来评价关节炎指标，最后将大鼠处死取静脉血，ELISA法检测其血清中抗CⅡ抗体、IL-10、IFN-γ和TNF-α四个因素的含量水平。结果表明，经口灌服CⅡ后可以使大鼠产生免疫耐受并能显著改善关节炎进程，降低其炎症性指标。