【摘 要】
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目的本研究旨在探索长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）KCNQ1OT1在糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）患者血清中的表达及其对高糖（high glucose,HG）诱导的肾小管上皮细胞炎症反应、氧化应激和焦亡的影响。方法1.纳入30例DN患者,并招募30例健康志愿者为对照组,采集所有受试者外周血并分离血清,RT-qPCR检测血清中lnc
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目的本研究旨在探索长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）KCNQ1OT1在糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）患者血清中的表达及其对高糖（high glucose,HG）诱导的肾小管上皮细胞炎症反应、氧化应激和焦亡的影响。方法1.纳入30例DN患者,并招募30例健康志愿者为对照组,采集所有受试者外周血并分离血清,RT-qPCR检测血清中lncRNAKCNQ1OT1的表达水平。2.体外培养HK-2细胞,用不同浓度的葡萄糖诱导不同时间,RT-qPCR检测lncRNAKCNQ1OT1在各组HK-2细胞中的表达水平。3.建立shRNA-KCNQ1OT1敲低载体并转染HK-2细胞系,采用ELISA法检测细胞炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1的水平,ELISA试剂盒分别检测ROS、MDA和SOD以反映细胞的氧化应激水平,RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD-N等细胞焦亡相关基因和蛋白的表达水平。4.RT-qPCR检测miRNA-506-3p在DN患者血清和沉默KCNQ1OT1的HG诱导的HK-2细胞中的表达水平。5.利用双荧光素酶报告基因检测系统研究lncRNA KCNQ1OT1和miR-506-3p之间的相互作用关系。6.用 miR-506-3p mimic 单独或联合 pcDNA-KCNQ1OT1 处理 HK-2 细胞,ELISA法检测细胞炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1的水平,ELISA试剂盒分别检测ROS、MDA和SOD以反映细胞的氧化应激水平,RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD-N等细胞焦亡相关基因和蛋白的表达水平。结果1.lncRNA KCNQ1OT1在DN患者血清中表达升高。2.HG 诱导 HK-2 细胞高表达 lncRNA KCNQ1OT1,且 lncRNA KCNQ1OT1 表达水平随时间延长逐渐升高,48h的lncRNA KCNQ1OT1表达量显著高于12 h和24 h组（p＜0.001）。3.沉默KCNQ1OT1明显降低了 HG诱导的HK-2细胞中炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1的水平,减少了 ROS和MDA的含量,提高了 SOD的活性,抑制了 NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD-N等细胞焦亡相关基因和蛋白的表达。4.miRNA-506-3p在DN患者血清中的表达降低,而沉默KCNQ1OT1使HG诱导的HK-2细胞miR-506-3p的表达升高。5.lncRNAKCNQ1OT1直接靶向调控miR-506-3p的表达。6.过表达miR-506-3p显著降低了 HG诱导的HK-2细胞中炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1的水平,减少了 ROS和MDA的含量,提高了 SOD的活性,抑制了 NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD-N等细胞焦亡相关基因和蛋白的表达。结论1.lncRNA KCNQ1OT1 作为 miR-506-3p 的竞争性内源 RNA（competing endogenous RNA,ceRNA）,可能通过抑制miR-506-3p的表达进而引起下游相关靶基因和蛋白的表达变化。2.lncRNA KCNQ1OT1能促进肾小管上皮细胞的炎症反应、氧化应激和焦亡过程,对DN的发生发展起促进作用。
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