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本研究将鸡传染性贫血病毒(CIAV)vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,鉴定阳性重组质粒,将该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18kDa。Western blot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清发生特异性反应。用原核表达的CIAV VP3和VP2蛋白作为免疫原,免疫7周龄BALB/c雌性小鼠,三次加强免疫后取脾细胞与骨髓瘤(SP2/0)细胞融合,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选检测,阳性细胞经三次有限稀释法克隆培养,最后获得十株特异性单克隆抗体(Monoclonal antibodies,McAbs),针对CIAV VP3蛋白有三株,分别为AG2、BC11、FG1;针对CIAV VP2蛋白有七株,即3B4、3C9、3D7、3D10、4G11、4G7、5C6。AG2、BC11、FG1腹水和细胞培养液上清的ELISA效价分别是:2×10~6、1×10~6、2.5×10~5和2.5×10~2、1.5×10~2、1×10~2;3B4、3C9、3D7、3D10、4G11、4G7、5C6腹水和细胞培养液上清的ELISA效价分别是:2×10~6、2.5×10~5、1×10~6、2×10~5、2.5×10~4、1.5×10~6、1×10~5和1.5×10~2、1×10~2、2.5×10~2、2×10~2、50、2.5×10~2、1.5×10~2。染色体计数分析各株杂交瘤细胞的平均染色体数均在97～104之间,基本符合脾细胞与SP2/0细胞染色体数之和。十株针对CIAV VP3和VP2蛋白特异性McAbs与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、马立克氏病病毒(Marek,s disease virus,MDV)、传染性法氏囊病病毒(Chicken infectious bursal disease,IBDV)、呼肠孤病毒(Reovirus,REOV)和MSB1、Sf9细胞裂解物之间的交叉反应试验及免疫荧光(IFA)试验结果表明,这十株单抗与其它禽类病毒均不具有交叉反应,具有良好的特异性。这些特异性单克隆抗体的制备成功为CIA的诊断与鉴定奠定了基础。