【摘 要】
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目的了解高糖刺激对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）及巨噬细胞的影响,探索C型利钠肽受体（NPR-C）信号通路是否通过调控Nod样受体3（NLRP3）介导的细胞焦亡,改善高糖诱导的血管内皮细胞损伤及巨噬细胞炎症反应。方法分离获取人脐带静脉来源的HUVECs,佛波酯刺激THP-1细胞株获得单核巨噬细胞。建立高糖诱导损伤的HUVECs、巨噬细胞模型,加入NPR-C特异性激动剂c-ANF干预实验。细胞计数
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目的了解高糖刺激对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）及巨噬细胞的影响,探索C型利钠肽受体（NPR-C）信号通路是否通过调控Nod样受体3（NLRP3）介导的细胞焦亡,改善高糖诱导的血管内皮细胞损伤及巨噬细胞炎症反应。方法分离获取人脐带静脉来源的HUVECs,佛波酯刺激THP-1细胞株获得单核巨噬细胞。建立高糖诱导损伤的HUVECs、巨噬细胞模型,加入NPR-C特异性激动剂c-ANF干预实验。细胞计数试剂盒-8检测细胞存活改变。乳酸脱氢酶测定及Hoechst/碘化丙啶染色观察检测高糖对内皮细胞的毒性作用。划痕实验观察内皮细胞迁移功能。采用RT-PCR技术检测内皮细胞NLRP3等焦亡通路相关基因m RNA表达水平。结果1.HUVECs实验结果（1）细胞计数试剂盒-8实验显示,不同浓度高糖（11 m M,22 m M,33 m M,44 m M,55 m M）作用于HUVECs 24小时,预实验结果显示细胞活力随着糖浓度升高呈浓度依赖性下降（P<0.05）,同55 m M甘露醇对照组比较,细胞活力无统计学差异。选用33m M高糖继续完成后续实验。用不同浓度（1 n M,10 n M,100n M,1μM）c-ANF体外特异激活NPR-C,发现一定浓度c-ANF（100 n M,1μM）可以浓度依赖性抑制高糖诱导的HUVECs活力下降（P<0.05）。（2）乳酸脱氢酶检测显示,高糖作用于HUVECs 24小时,细胞上清液中乳酸脱氢酶分泌增多,c-ANF干预后乳酸脱氢酶较高糖对照组减少,可以减少高糖对HUVEC细胞毒性作用（P<0.05）。（3）Hoechst/碘化丙啶染色显示,高糖作用于HUVECs 24小时,高内涵成像分析仪观察可见高糖组死亡细胞增多,c-ANF干预组死亡细胞较高糖对照组减少（P<0.001）。（4）RT-PCR实验显示,高糖作用于HUVECs 24小时,与对照组相比,高糖组凋亡相关斑点样蛋白、NLRP3、消皮素D及caspase-1的m RNA表达量增高（P<0.05）;与高糖对照组相比,c-ANF干预组凋亡相关斑点样蛋白、NLRP3、消皮素D、及caspase-1的m RNA表达量降低（P<0.05）。（5）划痕实验显示,划痕损伤后高糖组细胞迁移距离较对照组减少（P<0.001）,c-ANF干预组迁移距离较高糖对照组增加（P<0.01）。2.单核巨噬细胞实验结果细胞计数试剂盒-8实验显示,（1）佛波酯刺激THP-1细胞株72小时获得单核巨噬细胞后,33 m M高糖作用24小时及48小时,可抑制巨噬细胞活力（P<0.05）,同浓度甘露醇对照组（33 m M甘露醇）比较,细胞活力无统计学差异。（2）同高糖组比,高糖+脂多糖组细胞活力显著降低（P<0.05）。（3）c-ANF对高糖或脂多糖处理下的巨噬细胞存活有一定的作用（P<0.05）,但无明显浓度依赖性。结论高糖可以诱导血管内皮细胞及巨噬细胞的损伤,NPR-C可能通过抑制高糖诱导的血管内皮细胞焦亡途径以及改善高糖对血管内皮迁移功能的损伤,从而发挥心血管保护作用。
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