【摘 要】
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背景Runt相关转录因子2（Runx2）是成骨表达的标志蛋白,溶酶体相关跨膜蛋白5（LAPTM5）与溶酶体的功能密切相关,而溶酶体既参与了成骨细胞矿化的过程,又在自噬中发挥作用。本课题组前期研究表明,Runx2可以反式激活LAPTM5的表达,而大量的文献证实,自噬与成骨细胞的矿化表达可能具有相关关系。本实验试图通过研究Runx2/LAPTM5在MC3T3-el矿化诱导过程中的表达情况以探究成骨与自
【基金项目】
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国家自然科学基金《压应力对成骨细胞的成骨和破骨双向效应的关键信号通路研究》,编号:81271187； 广东省省级科技计划项目《轻压力作用下成骨细胞的骨改建调控作用研究》,编号 2017A020215050；
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背景Runt相关转录因子2（Runx2）是成骨表达的标志蛋白,溶酶体相关跨膜蛋白5（LAPTM5）与溶酶体的功能密切相关,而溶酶体既参与了成骨细胞矿化的过程,又在自噬中发挥作用。本课题组前期研究表明,Runx2可以反式激活LAPTM5的表达,而大量的文献证实,自噬与成骨细胞的矿化表达可能具有相关关系。本实验试图通过研究Runx2/LAPTM5在MC3T3-el矿化诱导过程中的表达情况以探究成骨与自噬间的相关关系。方法1、在MC3T3-e1矿化诱导过程中,检测0～21 d茜素红染色情况,0～14d碱性磷酸酶染色情况,RT-qPCR及Western-Blot检测0～14 d Runx2、ALP、OCN等成骨相关指标及LAPTM5的表达。2、检测MC3T3-e1矿化诱导0～14 d P62、LC3的免疫荧光表达,透射电镜下观察自噬小体的变化,并RT-qPCR检测P62及Western-Blot检测P62、LC3等自噬相关指标的表达。3、过表达和干扰 Runx2/LAPTM5,RT-qPCR检测 Runx2、ALP、LAPTM5、P62 的表达,Western-Blot 检测 Runx2、ALP、LAPTM5、LC3 的表达。结果1、在MC3T3-el矿化诱导过程中,0～21d茜素红染色的矿化结节随时间变化而增多;0～14d,碱性磷酸酶染色中,蓝紫色颗粒的数量也增多;0～14 d,Runx2、ALP、OCN、LAPTM5 的 RT-qPCR 及 Western-Blot 结果表达呈现上升趋势。2、0～14d免疫荧光、透射电镜的结果提示,自噬在0～1 d内表达呈上升趋势,而后逐渐下降,0～14 d P62的RT-qPCR以及P62、LC3等自噬相关指标的Western-Blot的结果表明,自噬的表达在第1-2天内升高,随后逐渐下降。3、过表达Runx2后,成骨相关蛋白ALP的表达随之上升;自噬相关蛋白LC3也随着Runx2的过表达出现表达上升,P62随之下降;LAPTM5随之上升;干扰Runx2后出现了相反的结果。过表达LAPTM5后,成骨相关蛋白ALP的表达随之上升;自噬相关蛋白LC3也随着LAPTM5的过表达出现表达上升,P62随之下降;干扰LAPTM5后出现了相反的结果。LAPTM5的过表达和干扰对Runx2的表达影响不明显。结论1、在本研究中,在MC3T3-e1细胞矿化诱导过程中,0～14 d成骨的表达随时间推移而逐渐增高,自噬的表达在早期升高,而后逐渐下降。LAPTM5在成骨矿化过程中表达呈上升趋势。2、调控Runx2及LAPTM5的表达后,成骨和自噬的表达随之变化。即Runx2与LAPTM5与自噬和成骨均可能具有一定的相关关系,且Runx2可以调控LAPTM5的表达。3、已知成骨细胞诱导矿化早期发生的自噬与之后的矿化存在一定的相关关系,Runx2/LAPTM5可能在其中起到桥梁纽带作用。
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