鸡胚在孵化阶段依靠外界输入氧气参与机体基础生命代谢以维持机体正常发育,而后期随着加剧的胚胎生长会导致活性氧的加速产生,其过量的积累会打破氧化应激平衡,对机体造成干扰和损伤。此时存在于鸡胚内部的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、过氧化物酶(POD)等抗氧化酶会与之结合进而发生分解反应,以保证发育过程中的氧化应激平衡。有研究表明,在鸡胚整个孵化过程中分散在不同部位的抗氧化酶其种类和活性是持续变化的,然而对于调控抗氧化酶活性的作用机制尚未清晰,因此挖掘调控抗氧化酶活性的关键基因是本研究的主要目的。本课题基于转录组测序技术,筛选出鸡胚肝脏组织中调控抗氧化功能的差异表达基因,并构建过氧化氢诱导的鸡胚肝细胞氧化应激模型,以期探索关键基因的调控机理,试验结果如下所示:1.抗氧化酶活性检测结果:孵化期处于Day 12到Day 18的鸡胚肝脏组织中的SOD酶活和GSH-Px酶活均呈现先降低后增高的趋势,且Day 12和Day 16鸡胚肝脏组织的SOD酶活与GSH-Px酶活显著差异(p<0.05),因此,将孵化至Day 12和Day 16的鸡胚肝脏组织做为下一步转录组测序对象最合理。2.关键基因的鉴定和筛选:通过对Day 12和Day 16的两组鸡胚肝脏组织进行转录组测序,共发现显著差异表达基因216个(其中,上调基因81个、下调基因135个),富集分析获得421条显著富集的GO terms及8条显著富集Pathway。GO富集和KEGG通路分析表明GSTA3、GSTA、α-TTP、MGST3、HMOX2、GSTA1、ODC1、MAOA和GST可能是影响鸡胚发育过程中抗氧化酶活性变化的关键候选基因。3.关键基因的功能验证:分离鸡胚肝实质细胞体外培养,构建通过过氧化氢诱导细胞生长的氧化应激模型,并利用维生素C缓解作为对照组,对抗氧化关键基因进行荧光定量表达测定,结果表明:处理组中GSTA3基因表达量明显高于空白组及对照组(p<0.05)、GSTA3基因参与抗氧化调控作用,且高浓度的维生素C处理可有效缓解了机体损伤,1000μg/m L维生素C比750μg/m L维生素C缓解效果更优。本研究鉴定了新的鸡胚抗氧化相关基因,为进一步探究鸡胚肝脏的抗氧化机制奠定了一定的理论基础。