长链非编码RNA BANCR通过Raf-MEK-Erk通路调节甲状腺乳头状癌干细胞分子表面标记基因的表达

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[研究背景和目的]长链非编码RNA(Long non coding RNA,LncRNA)是一种非编码的RNA分子,参与转录的核苷酸数目超过200个,其中由于BRAF基因(V600E位点)突变后产生的一种新的长链非编码RNA被命名为BANCR。研究显示,有些肿瘤细胞具有与众不同的标记,并且在肿瘤的增殖,分化,迁移,侵袭中起到重要的作用,被命名为干细胞。已有文献报道BANCR在甲状腺癌组织中的表达量增高,可以促进甲状腺癌细胞增殖,同时在临床观察中发现甲状腺癌组织中CSCs标志物自我更新频率与不良预后有关。然而,关于BANCR对于肿瘤细胞干性特征的影响,尚未检索到文献报道。因此本研究旨在探究BANCR对于甲状腺癌干细胞分子表面标记基因的作用机制。[实验方法]采用qReal-time PCR检测LncRNA BANCR在甲状腺癌组织,癌旁组织及细胞株中的表达;构建过表达和敲减BANCR的细胞株;应用CCK-8检测细胞增殖,并将细胞悬液对小鼠进行皮下注射,观察肿瘤的生长;应用Western blot和流式细胞术检测LGR5和EpCAM的表达;应用克隆及微球体形成实验检测癌细胞成球能力;采用 Western blot 检测 c-Raf、MEK1/2、Erk1/2 和 p-c-Raf、p-MEK1/2、p-Erk1/2的表达,并在加入抑制剂后,再次检测。[结果](1)BANCR在甲状腺癌组织中的表达量显著增高,在NPA中表达量中最高,在BCPAP、CAL-62、KMH-2中的表达量均比较低。(2)过表达BANCR可促进BCPAP增殖并且促进小鼠成瘤,敲减BANCR则结果相反。(3)BANCR过表达可以促进细胞株克隆形成、微球体形成。(4)BANCR过表达可以促进LGR5、EpCAM、N-cadherin、p-c-Raf、p-MEK1/2、p-Erk1/2 的表达;BANCR 敲减结果相反;而加人 U0126 后,BANCR 对 LGR5、EpCAM、p-c-Raf、p-MEK1/2、p-Erk1/2 表达的调控作用被逆转。[结论]本课题以构建长链非编码RNA,即BANCR过表达和敲减的稳转细胞株为基础,证明了在甲状腺癌细胞中,BANCR可以通过Raf-MEK-Erk信号通路调控甲状腺癌干细胞分子表面标记基因LGR5和EpCAM的表达。
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