论文部分内容阅读
[目的]近年大量的研究结果证实长链非编码RNA (lncRNAs)在肿瘤的发生发展过程中发挥了重要的调控作用。已有研究表明BRAF激活的长链非编码RNA(BRAF-activated long non-coding RNA, BANCR)在黑色素瘤中高表达,并且能促进黑色素瘤细胞的迁移。本研究拟通过检测BANCR在结直肠癌中的表达,研究BANCR对结直肠癌细胞功能的影响,初步揭示BANCR在结直肠癌中的作用及相关分子机制。[方法]1.收集56例结肠癌和直肠癌手术标本(癌组织和癌旁组织),荧光实时定量PCR (qRT-PCR)检测56例标本中BANCR的表达,并分析其与临床病理资料的关系;qRT-PCR分别检测结直肠癌细胞HCT116、LoVo、HT-29、SW480、 SW620、Caco-2和正常肠上皮细胞CCD841CoN中BANCR的表达。2.构建质粒和慢病毒,分别建立低表达和过表达BANCR的稳转细胞株,用CCK-8、流式细胞技术、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖、凋亡和迁移能力。3.显微镜下观察BANCR低表达和过表达前后细胞形态的变化;Western Blot, qRT-PCR分别检测BANCR低表达和过表达后稳转细胞株中EMT(Epithelial-Mesenchymal Transitions,上皮间质转化)相关蛋白(E-Cadherin和Vimentin)的表达。4.用ERK通路抑制剂U0126分别作用于正常及过表达BANCR的HCT116细胞株,Transwell实验检测细胞迁移能力的变化,qRT-PCR、Western blot检测E-Cadherin和Vimentin表达的变化。[结果]1.BANCR在结直肠癌组织中的表达量(1.64±0.4)高于癌旁组织(0.94±0.7),差异有统计学意义(P<0.05)。临床病理资料单因素统计分析结果显示:BANCR的高表达与肿瘤分期、淋巴结转移相关(P<0.05),多因素分析结果显示:有淋巴结转移和肿瘤分期Ⅲ-Ⅳ期是影响BANCR高表达的独立危险因素。与正常肠上皮细胞相比,BANCR在HCT116、LoVo、HT-29、SW480、SW620细胞中表达明显升高(P<0.05),而在Caco-2细胞中无明显差异(P>0.05)。2.成功构建BANCR低表达和过表达稳转细胞株,划痕实验和Transwell实验证实BANCR可促进结直肠癌细胞迁移。但CCK-8、流式细胞技术结果显示BANCR对细胞增殖和凋亡无明显影响。3.显微镜下观察细胞形态结果显示:BANCR低表达后,HCT116细胞形态由梭形、类似于成纤维细胞变成了圆形或卵圆形;Western blot、 qRT-PCR结果显示:HCT116细胞中,BANCR低表达后,E-Cadherin表达量增加,Vimentin表达量减少;Caco-2细胞中,BANCR过表达后,E-Cadherin在基因水平表达量减少,Vimentin表达量在基因和蛋白水平均增加。4.加入ERK通路特异性阻滞剂U0126后,Transwell实验结果显示细胞迁移明显减少;qRT-PCR、Western blot结果显示E-Cadherin表达量增加,Vimentin表达量减少。[结论1BANCR的高表达与淋巴结转移及肿瘤分期密切相关,相较正常肠上皮细胞,BANCR在结直肠癌细胞中高表达,并能通过ERK通路促进结直肠癌细胞的迁移,诱导结直肠癌细胞发生上皮间质转化,对细胞增殖和凋亡无明显影响。