核桃（Juglans regia L.）又名胡桃,合桃、羌桃等,是胡桃科（Juglandaceae）、胡桃属（Juglans L）植物,它分布广泛,是世界著名干果之一。近年来,随着核桃种植面积的增加,核桃黑斑病日益频发,影响核桃产业的健康发展。由于该病害早期症状难以靠肉眼分辨,且传统形态学鉴定存在困难,因此急需建立能够在病害发生早期快速检测该病害的分子生物学诊断方法。本研究以核桃黑斑病菌Xanthomonas campestris pv.为研究对象,以其16s RNA序列为靶标,设计合成特异性引物,并建立、优化核桃黑斑病菌X.campestris pv.实时荧光PCR特异性检测体系,为快速检测核桃黑斑病菌X.campestris pv.提供有效的技术支持。本研究取得如下结果:1.对核桃黑斑病菌X.campestris pv.序列进行比对,然后利用Primer5.0和Oligo6.0软件设计出核桃黑斑病菌X.campestris pv.的特异引物:XC-F（5′-TACCCGATTGTTCTGACG-3′）;XC-R（5′-ATTCCGCTACCCTCTACCAC-3′）。PCR扩增结果表明,进行温度筛选后的特异性引物XC-F/XC-R能在核桃黑斑病菌X.campestris pv.为模板c DNA的PCR反应体系中扩增得到约为211 bp大小的单一条带,而其它供试菌株和阴性对照均无此条带。2.本研究成功建立了适合供试菌株的最佳实时荧光PCR反应体系。利用优化后的反应体系及反应参数对23组供试菌的模板c DNA进行实时荧光PCR扩增,核桃黑斑病菌X.campestris pv.所产生的特异性扩增曲线在30个循环以内便出现了,而其它供试菌在30个循环以后才出现扩增曲线或没有出现扩增曲线,将此扩增结果与上述供试菌的普通PCR扩增的电泳结果进行对比分析,发现两种方法的检测结果完全一致。3.利用优化后的反应体系及反应参数扩增不同浓度的核桃黑斑病菌X.campestris pv.模板c DNA,结果表明,当模板c DNA浓度≥7.0×10-5μg/ml时,该反应体系均可以特异性扩增,即该标准方法的检测灵敏度为7.0×10-5μg/ml。4.通过对田间自然发病植株的验证,上述建立的实时荧光PCR检测体系能准确地检测到处于不同发病程度的核桃叶片组织中的核桃黑斑病菌X.campestris pv.。本研究所采用的实时荧光PCR是一种快速、准确的检测技术,符合田间检测要求,可以用于核桃黑斑病的早期诊断和病原鉴定。