蒙古黄芪多糖的分离纯化、结构鉴定及对糖尿病肾病的改善作用研究

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蒙古黄芪多糖(Astragalus Mongholicus polysaccharides,m APS)是蔷薇亚纲豆科植物蒙古黄芪中的有效成分之一,已被广泛证实具有降血糖、抗氧化、消炎等药理作用。本实验从蒙古黄芪中分离纯化m APS,并对其进行了特性进行了分析。结果表明,通过水提和分级醇沉的方法从蒙古黄芪中分离出m APS1、m APS2、m APS3三个多糖组分,得率分别为1.29%、5.54%和3.78%。苯酚硫酸法测定葡萄糖量分别为57.1%、72.8%和63.6%。扫描电镜结果显示,m APS2相比于m APS1和m APS3具有更致密的酥松多孔结构。通过Sephadex-G100葡聚糖凝胶纯化后的m APS2和m APS3,在紫外全波长下呈现出流畅平滑的弧线;傅里叶变换红外光谱(FT-IR)结果显示,m APS2和m APS3中有亚甲基、羧基或醛基、和吡喃糖等的特征吸收峰。通过ABTS和DPPH自由基清除实验发现,m APS2和m APS3相比m APS1有更好的自由基清除效果。Ⅱ型糖尿病(T2DM)是一种综合代谢相关疾病,伴有诸多并发症,糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见的微血管并发症及主要死亡原因之一。由于其发病机制复杂,目前尚无特效治疗药物。近年来研究表明,中药治疗DN疗效显著,且副作用少。在本实验中,我们研究了m APS对DN的缓解作用和机制。雄性SD大鼠60只随机分为5组:空白组(Ctrl)、m APS对照组(m APS,200 mg/kg)、模型组(T2DM)、m APS治疗组(T2DM+m APS,200 mg/kg)、二甲双胍(MET)治疗组(T2DM+MET),除Ctrl组和m APS组,其余3组给予高糖高脂饲料喂养4周,禁食12 h后,腹腔注射链脲菌素(STZ)(35 mg/kg)。一周后检测空腹血糖高于11.1mmol/L认为模型成功。在此基础上给予m APS(200 mg/kg)或MET(300 mg/kg)灌胃给药4周。结果表明,m APS治疗后T2DM大鼠的体重、摄食量和饮水量有显著的改善(p<0.05);血糖水平显著降低(p<0.05)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著降低(p<0.05);血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量均显著降低(p<0.05);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量显著升高(p<0.05)。m APS灌胃后也显著降低了肾脏重量、肾体比、降低了血清中尿素氮(BUN)肌酐(Cr)、和尿酸(UA)的含量(p<0.05)。组织病理学结果显示,m APS减轻了DN大鼠肾小管的空泡化和炎性细胞浸润。Masson染色的结果表明,m APS能降低DN大鼠肾脏纤维素的沉积m APS给药后,DN大鼠血清中MDA含量显著降低(p<0.05),GSH和GSH-Px的含量显著升高显著(p<0.05);同时肾脏组织中Nrf-2、HO-1、SOD-2、NQO-1的m RNA和蛋白表达水平也显著增高(p<0.05)。进一步研究发现,m APS显著降低了T2DM大鼠血清中LPS、IL-1β和TNF-α的含量(p<0.05),同时m APS下调了T2DM大鼠肾脏组织中TLR4、NLRP3和p-NF-κB的表达。大鼠肾脏组织中TLR4、NLRP3、IL-1组和TNF-组的m RNA的表达量也下调。结论:从蒙古黄芪中分离纯化到具有抗氧化活性的蒙古黄芪多糖组分m APS2。蒙古黄芪多糖通过抗氧化和抗炎效应改善T2DM导致的糖尿病肾病。
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