水稻草状矮化病毒（Rice gray virus,RGSV）是纤细病毒属（Tenuivirus）的一个成员,由褐飞虱（Nilaparvatalugens Stal.）以持久增殖型方式传播,但不经卵传播。该病毒的自然寄主仅有水稻,人工接种可侵染稻属所有的种。水稻感染该病毒后,可导致水稻产生叶片黄化,植株矮化,分蘖增多等症状,感病水稻基本不抽穗,对水稻生产造成严重危害。RGSV自1963年在菲律宾发现以来,至今已有55年的历史。然而,关于RGSV基因组编码蛋白的功能、致病机理及其与寄主的互作等方面的报道较少。为了分析RGSV的致病机制及其编码蛋白的功能,本研究利用马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）异源表达载体为骨架,分别构建了 RGSVP2、P3、PC3、P4、PC4、P5、PC5、P6和PC6等9个蛋白的PVX过表达载体,通过农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导的瞬时表达体系注射16c-TGS烟草,对RGSV编码蛋白的致病性及其可能参与的基因沉默机制进行探索。本研究以PVX空载体为阴性对照,以PVX-βC1载体为阳性对照。结果显示,注射后5天,阳性对照PVX-βC1注射烟草的系统叶开始表现出叶片卷曲、皱缩等症状,通过紫外灯下监测烟草中绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）的信号并记录各病毒蛋白载体的表达情况。注射后12天,在紫外灯下检测绿色荧光蛋白的表达情况;同时,将样品取样,运用qRT-PCR和Western blot的方法分别检测基因和蛋白的表达情况。基于16c-TGS系统,利用紫外检测结果表明,RGSV编码的各蛋白注射16c-TGS烟草后,除了 PVX-P3和PVX-P5能检测到弱的绿色荧光外,其它蛋白并没有检测到绿色荧光蛋白信号。我们进一步对烟草中GFP的表达量进行Western blot检测,结果显示,阳性对照组PVX-βC1载体注射的烟草中GFP表达量最高,实验组中PVX-P3和PVX-P5注射的烟草中GFP的表达量比RGSV编码的其它蛋白显著提高,此外,我们又对GFP进行了 qRT-PCR的检测,结果与Western blot检测结果相符,这可能暗示RGSV编码的P3和P5具有弱的转录水平的沉默抑制活性。为了分析P5和P3是否与其它RGSV编码蛋白共同调控病毒的致病性,我们将P5、P3分别和RGSV的其它8个蛋白共注射烟草,观察烟草表型。结果表明,共注射后对各蛋白表型出现时间并没有太大影响,并且P5、P3与其它蛋白共注射后表现出P5和P3蛋白的致病症状,qRT-PCR对PVX外壳蛋白CP基因的检测结果表明,共注射与单独注射PVX-P5和PVX-P3载体对PVX的致病性增强并无影响。综上所述,RGSV编码的P3和P5可能具有转录水平的沉默抑制功能,并且P3和P5蛋白与其它蛋白共注射后对PVX的致病性增强并无明显影响。该研究利用PVX-烟草系统异源表达RGSV各个编码蛋白,分析其致病性,为解析RGSV编码蛋白可能参与的水稻病害症状形成和致病机理奠定了基础。