3-蒈烯对荧光假单胞菌的抑菌机理研究

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3-蒈烯是胡椒油等植物精油的主要挥发性成分,具有抑菌效果,在食品防腐领域有广阔前景。本研究主要考察3-蒈烯对荧光假单胞菌抑菌活性、形态结构及呼吸和能量代谢等的影响,结合代谢组学,转录组学和相关酶活性研究,揭示3-蒈烯对荧光假单胞菌的抑菌机理。为开发3-蒈烯作为食品防腐剂提供理论基础。实验结果如下:(1)通过测定最小抑菌浓度(MIC)和生长曲线,探究3-蒈烯的抑菌效果。(2)通过电镜观察、细胞内容物泄漏等试验来探究3-蒈烯对细菌膜结构和通透性造成的损伤。结果表明3-蒈烯损害了荧光假单胞菌的形态和结构,膜通透性增加,细胞内电解质及大分子物质如蛋白质等的外泄。(3)通过荧光光谱法研究了3-蒈烯与荧光假单胞菌DNA的相互作用,结果表明,3-蒈烯可能与细菌DNA结合,影响基因组DNA的构象和结构。(4)通过测定膜电位(MP),代谢活力和TCA循环等代谢途径中的关键酶活性发现3-蒈烯的加入导致荧光假单胞菌MP和胞内蛋白含量持续降低,细菌的代谢活力、呼吸链脱氢酶和TCA循环关键酶活性显著下降。ATP含量和Na+K+ATP酶的紊乱表明3-蒈烯可导致代谢紊乱,抑制能量合成。(5)采用代谢组学鉴定并筛选差异代谢物和代谢通路,并探究3-蒈烯对荧光假单胞菌的代谢机制。结果表明,与对照组相比,使用3-蒈烯处理12 h导致42种代谢物发生了显著变化,其中14种和28种分别上调和下调。3-蒈烯的处理会导致代谢过程的紊乱,包括氨基酸代谢,泛酸和辅酶A(Co A)的生物合成以及三羧酸(TCA)循环等代谢途径的异常。(6)采用RNA-seq技术对荧光假单胞菌进行了全基因组转录分析。结果表明,3-蒈烯作用于荧光假单胞菌导致共有785个差异表达基因,其中上调基因有307个,下调基因有478个。差异基因在氧化磷酸化、TCA循环和ABC转运蛋白等多种途径中均有显著富集。(7)代谢组和转录组的联合分析显示,氧化磷酸化和ABC转运蛋白和一些氨基酸代谢是3-蒈烯处理后改变的主要代谢途径。综上所述,3-蒈烯具有有效的抑菌作用,破坏荧光假单胞菌正常形态,造成胞内物质泄漏,引发细胞膜去极化现象,造成细胞代谢活动异常;3-蒈烯还可以与细菌DNA结合,造成DNA构象和结构的改变;3-蒈烯还抑制了荧光假单胞菌的呼吸和能量代谢,破坏了呼吸链;3-蒈烯能够通过造成细菌细胞内基因差异表达及代谢功能紊乱并发挥其抑菌作用。
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