氨甲蝶呤(Methotrexate，MTX)是一种细胞周期特异性的抗代谢药，用于抗肿瘤治疗，但是连续用药通常会使肿瘤细胞产生耐药性，造成化疗失败，目前已知的重要原因就是双微体(double minutes，DMs)或均质染色区上DHFR基因的扩增。DMs是病理状态下细胞核内、染色体外遗传单位的主要存在形式，无着丝粒、无端粒、可自主复制，常携带大量扩增的癌基因和耐药基因，为细胞生长提供选择优势或参与细胞耐药。　　 400μmol/L MTX可诱导NIH3T3细胞产生大量双微体，形成稳定的含DMs的MTX耐药细胞系MTX400。本实验通过双向电泳技术(two-demensional gelelectrophoresis，2DE)找到MTX400细胞系及其对照细胞系3T3的差异表达点140个，质谱鉴定得到71个蛋白点，这些数据去除冗余后得到51个蛋白，其中上调表达蛋白28个、下调表达蛋白23个。其中包括一些耐药相关蛋白和与DNA损伤修复相关的蛋白，说明我们的数据比较可靠地反应了耐药细胞中的蛋白质组学变化。通过GO注释对差异表达蛋白进行功能分类后发现，不论是表达上调还是表达下调的蛋白中，蛋白代谢、修饰和核酸代谢类的蛋白所占比例都较大。通过IPA(Ingenuity Pathway Analysis)软件对差异表达蛋白进行相互作用网络分析发现，H2O2、MYC和GRB2是相互作用图谱中比较重要的节点，提示这些物质在耐药细胞中发挥着比较重要的作用，可能与细胞耐药和DMs形成存在较大关联，为进一步探讨耐药和DMs形成机制提供了可供参考的研究基础。