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目的研究microRNA-200b(miR-200b)在大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)形成过程中的作用,初步探讨相关机制。方法1.选取40只雌性SD大鼠,采用缝线法构建单眼CNV动物模型(实验组),另一眼不做处理(正常组),造模后第4、7、14、21天于裂隙灯下观察角膜新生血管生长情况,RT-PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction)检测造模后不同时间点各组大鼠角膜组织中miR-200b以及VEGF mRNA的表达。HE染色(Hematoxylin-eosin staining)观察角膜组织的结构及炎症细胞的浸润。2.将miR-200b模拟物(miR-200b mimic)、miR-200b抑制物(miR-200b inhibitor)及其各自的阴性对照(Scramble)利用脂质体技术转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),RT-PCR验证转染效率。3.分别运用CCK-8、划痕实验、transwell以及Matrigel胶管腔法检测转染后HUVECS的增殖、迁移以及小管形成情况。4.通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组VEGF、PIK3CA、AKT蛋白的表达。结果1.构建大鼠CNV模型成功,RT-PCR结果显示与正常组相比,缝线后第4、7、14、21天角膜组织中miR-200b表达明显降低,第7天时最低(P<0.05),而VEGF表达明显升高,第14天出现峰值(P<0.05)。HE染色结果显示在缝线后第4、7、14、21天,与正常组相比,大鼠角膜组织结构排列紊乱,炎性细胞浸润加重,第14天出现峰值(P<0.05)。2.转染24h后,与各自Scramble组相比,miR-200b mimic组中miR-200b相对表达量显著升高(P<0.01),而miR-200b inhibitor组中miR-200b相对表达量显著降低(P<0.05),表明成功转染。3.与各自Scramble组相比,miR-200b mimic组可见HUVECs的增殖、迁移及小管形成能力显著下降(P<0.05),而miR-200b inhibitor组可见HUVECs的增殖、迁移及小管形成能力显著增加(P<0.05)。4.转染48h后,miR-200b mimic可使HUVECs中VEGF、PIK3CA、p-AKT蛋白表达量显著下降(P<0.05),而miR-200b inhibitor可使HUVECs中VEGF、PIK3CA、p-AKT蛋白表达量显著升高(P<0.05)。结论缝线诱导的大鼠角膜新生血管中miRNA-200b表达下降,并且miRNA-200b可显著抑制HUVECs的增殖、迁移及小管形成能力,这可能与抑制PIK3CA/AKT通路的信号传导有关。