【摘 要】
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目的:喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）发病的分子机制复杂,还没有完全揭示。本文旨在探究色素框同源蛋白8（chromobox protein homolog 8,CBX8）在喉鳞癌和正常黏膜组织中的表达情况,以及其与患者预后、临床病理特征的关系;通过在喉鳞癌细胞系中构建CBX8敲低模型,探讨CBX8对喉鳞癌增殖、迁移、侵袭和凋亡等的影响。方
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目的:喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）发病的分子机制复杂,还没有完全揭示。本文旨在探究色素框同源蛋白8（chromobox protein homolog 8,CBX8）在喉鳞癌和正常黏膜组织中的表达情况,以及其与患者预后、临床病理特征的关系;通过在喉鳞癌细胞系中构建CBX8敲低模型,探讨CBX8对喉鳞癌增殖、迁移、侵袭和凋亡等的影响。方法:从TCGA和GEO数据库下载喉鳞癌患者的信息矩阵,进行CBX8泛癌分析、在喉鳞癌中的表达以及其与预后的关系。同时收集30对喉鳞癌患者的组织标本,实时荧光定量PCR与免疫组化实验检测CBX8在癌组织和配对正常组织中的表达情况,并分析其与喉鳞癌患者临床病理特征的关系。构建CBX8敲低模型,并通过实时荧光定量PCR筛选出敲低效率最高的si RNA序列,之后在喉鳞癌细胞系AMC-HN-8及Hep2中,采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）和Ed U增殖实验评估细胞增殖活力;划痕愈合实验和Transwell实验用以检测喉鳞癌细胞迁移和侵袭的能力;流式细胞术探究CBX8对细胞凋亡的影响;透射电镜观察细胞内部结构的变化;敲低喉鳞癌细胞中CBX8的表达,Western blot法检测Bcl2、Bax、β-catenin、DKK1、GSK3β、N-cadherin、E-cadherin、Snail1等蛋白的水平。结果:1、数据库分析可以看出CBX8在包括头颈部鳞状细胞癌的常见30种肿瘤中高表达,进一步从TCGA数据库中分析得到CBX8 m RNA在喉鳞癌中也高表达;2、实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）结果显示:在喉鳞癌组织中CBX8m RNA表达量高于癌旁正常黏膜,具有统计学意义（P＜0.05）;3、免疫组化结果显示:CBX8蛋白在喉鳞癌组织中高表达,与癌旁相比具有显著差异（P＜0.05）;4、公共数据库TCGA及GEO中患者Kaplan-Meier生存分析结果表明,高表达CBX8喉鳞癌患者的生存时间明显短于低表达患者,并且伴有淋巴结转移和Ⅲ/Ⅳ期患者的生存时间也明显缩短;5、CBX8的表达与临床病理特征中的相关性分析显示,其与淋巴结转移情况及临床分期有关（P＜0.05）;6、敲低CBX8后,AMC-HN-8及Hep2细胞增殖减慢、Ed U-阳性细胞的数量减少;划痕愈合减慢;Transwell侵袭细胞数减少;流式凋亡实验显示凋亡细胞百分比升高,同时凋亡蛋白Bax升高,而抗凋亡蛋白Bcl2表达降低;透射电镜显示细胞核变形,线粒体结构被破坏,形成空泡结构,细胞状态变差。敲低CBX8后β-catenin、N-cadherin、Snail1蛋白表达降低,DKK1、GSK3β及E-cadherin蛋白表达增加。结论:CBX8在喉鳞癌组织中高表达,与患者生存时间负相关,并且与临床分期、淋巴结转移正相关;CBX8在体外促进喉鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制凋亡;CBX8可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路参与EMT调控,促进喉鳞癌进展,导致患者预后不良。
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