葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)发生于眼球葡萄膜包括虹膜、睫状体和脉络膜,是成人眼中最常见的恶性肿瘤。不同于皮肤黑色素瘤能通过淋巴道和血道转移到肺、淋巴结等多个器官,UM主要是通过血道转移至肝脏。肝转移是UM病人死亡的最主要原因,超过95%的病人在死亡时都有肝转移。目前,无有效的方法治疗UM转移的病人,一旦发现转移,UM病人的平均生存期只有仅仅6到8个月,因此,临床上迫切需要采取新的方法和手段诊断和治疗UM的患者,提高患者的生存期。核酸适体是通过模拟自然进化过程的人工筛选技术一指数富集配体系统进化技术筛选得到的单链DNA或者RNA分子,能通过折叠形成特定的三维结构和靶标分子特异性识别并结合。由于核酸适体具有高亲和力、高特异性、低免疫原性,易合成、改造与标记,生物化学稳定性好、能可逆变性与复性、还能通过酶扩增、剪切等特性,近年来在生物医学领域显示出广阔的应用前景。本论文以葡萄膜黑色素瘤细胞OCM-1为研究对象,开展能特异性识别UM的核酸适体的鉴定工作,对明确靶向UM细胞的核酸适体性质做了多方面的考察,并对靶标类型进行了初步鉴定。本论文主要研究的工作包括:(1)核酸适体的鉴定以葡萄膜黑色素瘤细胞OCM-1为靶细胞,以正常葡萄膜黑色素永生化细胞(Uveal melanocyte,UC)为对照细胞开展实验。通过流式细胞术对实验室已有的28条单链DNA进行鉴定,明确了能够特异性靶向OCM-1的核酸适体XQ-2d。(2)核酸适体XQ-2d的性质考察为了使核酸适体能更好的应用于UM的检测和治疗,我们对核酸适体XQ-2d的多方面性质进行了考察。通过流式和共聚焦检测,证明了核酸适体XQ-2d具有特异性,只与OCM-1结合而不与UC结合。通过对核酸适体XQ-2d与靶细胞OCM-1的亲和力进行考察,结果显示核酸适体XQ-2d与靶细胞OCM-1结合的解离常数为40.4±12.9nM,仅在nM级水平,证明了核酸适体XQ-2d与OCM-1具有较强的亲和力。另外用胰蛋白酶和蛋白酶K处理靶细胞OCM-1,初步证实了核酸适体XQ-2d与靶细胞OCM-1的膜蛋白结合。同时,内在化实验也说明,XQ-2d在生理条件下能够进入靶细胞OCM-1内部,因此可以作为特异性靶向分子,为应用于靶向给药和靶向治疗奠定了重要的基础。(3)核酸适体在靶向给药中的应用首先构建了以核酸适体为载体的靶向给药系统,同时用流式检测了阿霉素(Doxorubicin,Dox)的装载不会影响XQ-2d的靶向能力并也初步探寻了嵌合链XQ2d-Dox和XQ-2d结合在UM的同一结合位点。最终用流式初步探索嵌合链的内化情况,结果显示在癌细胞中,嵌合链的荧光强度与自由的Dox荧光强度相同,而在正常细胞中,嵌合链中Dox的荧光强度远远低于自由的Dox荧光强度,初步验证了所构建的核酸适体载药系统拥有一定的载药能力。