猪流行性腹泻病毒rS1蛋白亲和肽的筛选与鉴定

被引量 : 5次 | 上传用户:wei616
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemicdiarrhea virus,PEDV)引起的一种急性、高度接触性肠道传染病,猪流行性腹泻病在各地区广泛流行,造成了很大的经济损失。猪流行性腹泻病毒的研究成为现今研究的热点之一。猪流行性腹泻主要以严重的呕吐、脱水和腹泻为特征,尤其对仔猪致病性最强。猪流行性腹泻病毒S蛋白是重要的表面结构蛋白,含有主要的抗原决定簇和受体结合域,且具有较好的免疫原性。本研究对猪流行性腹泻病毒S蛋白的免疫优势区和受体结合域进行鉴定与生物淘选,为猪流行性腹泻病毒诊断方法和新型疫苗的开发及抗病毒机制研究提供信息。本研究成功将扩增的猪流行性腹泻病毒rS1基因克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-rS1,经IPTG诱导,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。以重组蛋白作为免疫原制备兔抗rS1抗体并进行效价测定及生物活性检测。结果证实多抗效价达1:65536,间接ELISA和Western-Blot实验证实此多抗可与rS1蛋白发生很好的抗原抗体反应,说明该多抗能够用于rS1蛋白特异性检测。进一步的研究以猪流行性腹泻病毒rS1重组蛋白为靶分子,通过噬菌体生物淘选,对其进行了五轮噬菌体筛选。第四轮对表达载体pGEX-6P-1的标签蛋白GST进行筛选,对第五轮洗脱物随机淘选到的10个噬菌体进行序列测定,最终共得到五种噬菌体序列,其中6个噬菌体展示一致序列-SSTPSGHWHVSW-。Phage-ELISA结果显示,五种噬菌体均具有良好的敏感性及特异性。通过间接免疫荧光和实时荧光定量PCR检测人工合成的多肽体外抗病毒活性,结果显示猪流行性腹泻病毒与多肽共同孵育1h后再加入Vero-E6细胞该作用方式有抑制病毒的作用。本研究为寻找猪流行性腹泻病毒受体提供了一定的理论基础,对新型多肽疫苗的开发具有参考价值。
其他文献
校园欺凌现象已上升为世界各国高度关注的社会问题,加拿大在预防欺凌方面取得一定成效。加拿大不同省有不同的政策和法案去阻止和杜绝校园欺凌现象,安大略省在2013年1月出台
光子晶体是由不同介电常数的物质在空间周期性排列而形成的人工微结构。基于光子晶体的光子禁带及光子局域特性制作的光子晶体器件具有体积小、集成度高、性能优异的特点,在未
为进一步引深党的群众路线教育实践活动,深化“培树十型干部,打造反腐铁军”行动,推进“廉洁乡村、制度乡村”建设,根据晋城市纪委“三级纪检监察干部住百村,聚焦维护群众利
本文是一篇关于文化类文本的翻译项目报告。翻译文本选取的是《蒙古族民俗常识》的后半部分,即从第四讲第四课到第八讲作为翻译文本内容。该文本介绍了蒙古族的艺术、竞技、
家庭是一国社会最基本的组成团体,如果说社会是一张网,那么家庭就是组成这张网的一个节。家庭在社会中扮演者必不可少、举足轻重的角色。对于每个公民来讲,谈及家庭,给人的感
钢-砌体组合墙梁作为托换结构的新型托换技术,不需要支护和施工模板、施工工期短,可以缩短养护周期,及早发挥改造后的商业价值。前期对组合托换梁进行了试验研究,试验结果表
装备制造业作为国民经济的主脉产业,其竞争力直接决定一个国家或地区的工业化程度和工业发展水平,是其它行业发展的强力支撑。我国装备制造业经过半个多世纪的发展,虽然与西
中医辨证是中医学的重要组成部分,是中医基础理论知识的最直接反应。辨证主要是指根据望闻问切四诊来取得患者的症状信息,由中医专家来确定所属的证,进而进行针对性治疗,帮助患者
Android是目前世界上最流行的移动操作系统,当前全世界的Android用户量有几个亿。Android提供了供用户下载应用程序的应用市场,目前Android应用程序每月的下载量超过了15亿并且
目的:肱骨外上髁炎是临床上较常见的疾病,肱骨外上髁疼痛局部多不红肿,但是较重时局部可有微热,压痛明显,病程长者日久不愈可导致该处肌肉萎缩,肘关节伸屈旋转功能活动虽正常,但做特