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研究背景食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是中国常见的恶性肿瘤之一,尤其是在河南最为常见。恶性肿瘤的发生和发展需要经历一系列复杂的过程,可能涉及某些凋亡信号传导通路的激活和与之对应的抗凋亡信号传导通路的失活。Bit1(Bcl-2 inhibitor of transcription 1)是2004年发现的一个蛋白质,其正常的生理功能还不清楚。有研究认为,Bit1是一种线粒体蛋白,在生理状态下定位于线粒体。当细胞受到失黏附信号刺激时,Bit1蛋白转移至细胞胞浆中,转移而来的或者在细胞胞浆中外源表达Bit1蛋白时,其则会通过与胞浆中的AES(amino-terminal enhancer of split)蛋白结合成为复合体,而介导脱粘附发生的失巢凋亡,即非caspase(半胱氨酸蛋白酶)途径依赖的细胞凋亡。亦有研究认为Bit1蛋白定位在高尔基体中,与之前研究理论相悖,具有抗凋亡作用。Bit1与各肿瘤的关系,实验研究及文献报道甚少,且结果各异。至于Bit1与ESCC之间的关系,鲜有报道。为了更进一步探讨Bit1蛋白对食管鳞癌发生发展、侵袭转移的影响,本实验研究拟采用RNA干扰、蛋白免疫印迹(Western Blot)、Transwell侵袭技术、构建裸鼠皮下移植瘤模型并且首次运用干扰质粒(瞬转)与脂质体2000的混合液对瘤体进行干扰治疗,也是本课题的一个创新点,从体内和体外两个层面,更加深入的研究Bit1的表达对对ESCC细胞增殖、侵袭等生物学特性的影响,有助于了解Bit1与食管鳞癌发生、转移的关系,以期能够为食管鳞癌早期诊断靶点和个体化治疗方案提供一个新的思路。方法1.使用Western blot技术,检测6种ESCC细胞系中Bit1蛋白表达水平。2.采用Transwell侵袭技术,检测运用RNAi方法下调Bit1表达水平后EC9706细胞侵袭力的改变。3.构建裸鼠皮下移植瘤并且运用干扰质粒(瞬转)与脂质体2000的混合液对瘤体进行干扰治疗,检测运用RNAi方法持续下调Bit1的表达水平后,观察EC9706细胞成瘤作用的变化。4.采用SPSS17.0软件分析数据,多组定量资料比较采用单因素方差分析ANOVA(其中的两两比较用LSD)法;两样本均数采用t检验而定性资料用秩和。以α=0.05作为检验水准。结果1.Bit1在6种ESCC细胞系中的表达Bit1在4种分化程度较低的ESCC细胞株EC9706、Eca109、TE-13和KYSE70Bit1蛋白的表达量相对较高,而在分化程度较好的2种细胞株TE-1和KYSE450表达相对较低。2.下调Bit1表达水平,EC9706细胞侵袭能力的改变下调Bit1表达水平,转然后72h基因干扰效率达到62%;RNAi组穿膜的细胞个数显著少于阴性对照组(空载体转染组)(P<0.01),而在阴性对照组和未转染组之间,则不存在明显的差异(P>0.05)。3.裸鼠皮下成瘤实验表明,持续下调Bit1的蛋白表达,可以明显抑制裸鼠食管鳞癌移植瘤的生长。细胞的成瘤率为100%,于接种后第5d,10μg空载体组和10μg RNAi组之间比较,P<0.05,差异具有统计学意义,自第9d起至第21d,C组和D组比较,均P<0.05,差异均具有统计学意义;5μg RNAi组和5μg空载体组,在各个时间点上差异均无统计学意义(P>0.05)。结论1.Bit1蛋白的表达水平可能与ESCC的分化程度有关。2.下调Bit1蛋白的表达能够抑制EC9706细胞的侵袭能力。3.EC9706细胞具有很强的致瘤性,下调Bit1蛋白的表达可以显著抑制裸鼠瘤体的生长。