线粒体内膜蛋白Tim23的克隆及其验证

来源 :昆明医学院 昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luxinyiu
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近年来,线粒体在细胞中的作用越来越受到重视.据估计98﹪的线粒体蛋白质是由细胞核编码、细胞质核糖体合成后运往线粒体的.其中大部分转运到线粒体基质的蛋白质需要穿过线粒体外膜(Tom)后,逐渐进入内膜(Tim),与内膜转运机器Tim23等蛋白结合后才能最终到达线粒体基质发挥功能,在此过程中,线粒体内膜转运器Tim23具有重要的作用.因此,研究Tim23在细胞中所起的作用并加以干预是目前研究的思路之一,若Tim23的功能受到影响则可能影响到整个细胞的生长、增殖过程.遗憾的是,之前GenBank数据库中提供的Tim23 cDNA序列并不完整,仅仅是该基因序列的一部分,尤其是不具备完整的3/末端,这使得对Tim23的研究带来了一定的限制,因此,利用生物信息学技术获取Tim23全基因序列将对进一步研究Tim23是很有价值的.作者利用生物信息学技术,成功地利用电子克隆方法克隆到了人类新基因Tim23的cDNA全序列(1197bp),经Genbank确认为新基因(Genbank登记号:AY442341).该序列是迄今为止报道过的唯一完整的Tim23序列,更为重要的是,我们利用实验验证的技术路线,以电子克隆得到的ORF序列为模板设计引物,利用RT-PCR法从体外培养的人胚肺成纤维细胞cDNA中扩增该序列,结果经测序及EST数据库检索均证实了在人胚肺成纤维细胞中存在着Tim23的编码区.这些研究成果为将来研究Tim23在某些细胞(如人胚肺成纤维细23胞)生长过程中的影响作用提供了更可靠的依据,也为今后进一步探索Tim23对细胞生长影响的研究奠定了基础.
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