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红火蚁（Solenopsis invicta Buren）是世界上最具危险性的入侵生物之一，目前已入侵至20多个国家，对人体健康、公共安全、农林业生产及生态环境造成了极大破坏。如何安全有效防治红火蚁是亟待解决的问题。从天然产物中寻找红火蚁防治剂，是红火蚁防治的改良策略之一。植物内生真菌可产生活性显著、结构类型丰富的天然化合物，是寻找天然活性物质的重要资源宝库。为了探究植物内生真菌次生代谢产物对红火蚁的毒杀活性，以期为开发红火蚁绿色防治剂提供新的思路，我们开展了植物内生真菌的分离鉴定及其发酵产物对红火蚁毒杀活性的研究。本研究首先收集我国广西重要药用植物血散薯以及不同地区特色经济作物柑橘的健康植株样品，从健康组织中分离纯化和鉴定内生真菌，通过对各菌株的菌落形态观察结合分子鉴定技术对菌株进行鉴定。然后选取代表性菌株进行发酵培养，制备发酵粗提物。测定粗提物对红火蚁的触杀活性和胃毒活性，以探究供试植物内生真菌次生代谢产物对红火蚁的毒杀潜力，并分析其可能的作用机理。主要结果如下。
1.通过组织培养法从柑橘的叶和枝条以及血散薯的叶、茎和块根中分离纯化得到143株内生真菌。包括柑橘内生真菌72株和血散薯内生真菌71株。采用形态观察及ITS序列分析，鉴定了柑橘内生真菌30株，归为13科14属；鉴定了血散薯内生真菌38株，归为12科19属。
2.选取代表性内生真菌菌株35株，采用大米固体培养基发酵培养，乙酸乙酯提取，减压浓缩蒸干后，共获得35株内生真菌的乙酸乙酯粗提物。
3.通过药膜法测定了35株内生真菌乙酸乙酯粗提物对红火蚁的触杀活性，发现不同植物内生真菌粗提物对红火蚁具有不同程度的触杀活性。其中，5株内生真菌Stdif9、Stdif6、J-12、STJ-J-3-6、WZMG-Y-24的乙酸乙酯粗提物对红火蚁触杀活性显著，处理浓度为250mg/mL、处理24h时，红火蚁累计校正死亡率达到80%以上。
4.进一步测定了以上5株内生真菌Stdif9、Stdif6、J-12、STJ-J-3-6及WZMG-Y-24乙酸乙酯粗提物对红火蚁的触杀毒力。在处理24h内，J-12、Stdif9、Stdif6、WZMG-Y-24及STJ-J-3-6对红火蚁的LC50值分别为21.3728mg/mL、38.4955mg/mL、37.0552mg/mL、44.7600mg/mL、67.2784mg/mL。结果表明，选自血散薯的3株内生真菌Stdif6、Stdif9、J-12对红火蚁的触杀毒力大于柑橘内生真菌WZMG-Y-24和STJ-J-3-6。
5．采用水试管法测定了Stdif6、Stdif9、J-12乙酸乙酯粗提取物对红火蚁的液体饲喂胃毒活性。研究发现，3株内生真菌对红火蚁具有良好的液体饲喂胃毒活性及延迟毒性。在24h内的死亡率均低于25%；并且，在供试时间内（15d内），相同浓度的不同药剂对红火蚁的胃毒活性不同，同一药剂的不同浓度对红火蚁的胃毒活性总体上随处理浓度增加而增大。当处理浓度为1.000mg/mL时，以Stdif6处理的红火蚁，其累计死亡率达100%；而以Stdif9和J-12处理的红火蚁的死亡率均未超过80%。当处理浓度为0.100mg/mL时，Stdif6处理的红火蚁死亡率超过80%，Stdif9和J-12处理的红火蚁的死亡率均未超过70%。当处理浓度为0.010mg/mL时，Stdif6和J-12处理的红火蚁的死亡率达到50%以上。当处理浓度为0.001mg/mL时，Stdif6、Stdif9和J-12的死亡率均未超过50%。以上结果表明，Stdif6对红火蚁液体饲喂胃毒活性最为突出。
6．进一步测定了以上3株内生真菌毒饵药剂的室内胃毒活性。研究发现，3株内生真菌毒饵对红火蚁具有良好的毒饵饲喂胃毒活性和延迟毒性。并且，红火蚁死亡率随毒饵浓度的增加而增加。3株内生真菌不同浓度毒饵处理的红火蚁，在24h内的死亡率均小于5%。在供试时间内（15d内），当毒饵浓度为50.000mg/g时，红火蚁的累计死亡率均接近100%。当处理浓度为25.000mg/g时，红火蚁的累计死亡率均超过90%。当处理浓度为12.500mg/g时，J-12毒饵处理的红火蚁的累计死亡率达到90%以上，Stdif6和Stdif9处理的红火蚁的累计死亡率达到60%以上。当处理浓度为6.250mg/g时，Stdif6、Stdif9、J-12毒饵处理的红火蚁的累计死亡率分别超过40%、70%、80%；当处理浓度为3.125mg/g，Stdif6、Stdif9、J-12毒饵处理的红火蚁的累计死亡率分别超过30%、20%、80%。以上结果表明，Stdif6、Stdif9、J-12对红火蚁均表现出较强的毒饵饲喂胃毒活性，J-12在处理浓度为3.125mg/g时，对红火蚁仍可表现出较高的毒饵饲喂胃毒活性。
本研究筛选得到了对红火蚁具有毒杀活性的植物内生真菌Stdif9、Stdif6、J-12、STJ-J-3-6、WZMG-Y-24，其中尤以血散薯内生真菌Stdif6、Stdif9、J-12毒杀活性显著。研究结果为后期进一步研究血散薯内生真菌菌株对红火蚁的毒杀机理奠定了基础，为其应用于红火蚁天然防治剂提供了依据。
1.通过组织培养法从柑橘的叶和枝条以及血散薯的叶、茎和块根中分离纯化得到143株内生真菌。包括柑橘内生真菌72株和血散薯内生真菌71株。采用形态观察及ITS序列分析，鉴定了柑橘内生真菌30株，归为13科14属；鉴定了血散薯内生真菌38株，归为12科19属。
2.选取代表性内生真菌菌株35株，采用大米固体培养基发酵培养，乙酸乙酯提取，减压浓缩蒸干后，共获得35株内生真菌的乙酸乙酯粗提物。
3.通过药膜法测定了35株内生真菌乙酸乙酯粗提物对红火蚁的触杀活性，发现不同植物内生真菌粗提物对红火蚁具有不同程度的触杀活性。其中，5株内生真菌Stdif9、Stdif6、J-12、STJ-J-3-6、WZMG-Y-24的乙酸乙酯粗提物对红火蚁触杀活性显著，处理浓度为250mg/mL、处理24h时，红火蚁累计校正死亡率达到80%以上。
4.进一步测定了以上5株内生真菌Stdif9、Stdif6、J-12、STJ-J-3-6及WZMG-Y-24乙酸乙酯粗提物对红火蚁的触杀毒力。在处理24h内，J-12、Stdif9、Stdif6、WZMG-Y-24及STJ-J-3-6对红火蚁的LC50值分别为21.3728mg/mL、38.4955mg/mL、37.0552mg/mL、44.7600mg/mL、67.2784mg/mL。结果表明，选自血散薯的3株内生真菌Stdif6、Stdif9、J-12对红火蚁的触杀毒力大于柑橘内生真菌WZMG-Y-24和STJ-J-3-6。
5．采用水试管法测定了Stdif6、Stdif9、J-12乙酸乙酯粗提取物对红火蚁的液体饲喂胃毒活性。研究发现，3株内生真菌对红火蚁具有良好的液体饲喂胃毒活性及延迟毒性。在24h内的死亡率均低于25%；并且，在供试时间内（15d内），相同浓度的不同药剂对红火蚁的胃毒活性不同，同一药剂的不同浓度对红火蚁的胃毒活性总体上随处理浓度增加而增大。当处理浓度为1.000mg/mL时，以Stdif6处理的红火蚁，其累计死亡率达100%；而以Stdif9和J-12处理的红火蚁的死亡率均未超过80%。当处理浓度为0.100mg/mL时，Stdif6处理的红火蚁死亡率超过80%，Stdif9和J-12处理的红火蚁的死亡率均未超过70%。当处理浓度为0.010mg/mL时，Stdif6和J-12处理的红火蚁的死亡率达到50%以上。当处理浓度为0.001mg/mL时，Stdif6、Stdif9和J-12的死亡率均未超过50%。以上结果表明，Stdif6对红火蚁液体饲喂胃毒活性最为突出。
6．进一步测定了以上3株内生真菌毒饵药剂的室内胃毒活性。研究发现，3株内生真菌毒饵对红火蚁具有良好的毒饵饲喂胃毒活性和延迟毒性。并且，红火蚁死亡率随毒饵浓度的增加而增加。3株内生真菌不同浓度毒饵处理的红火蚁，在24h内的死亡率均小于5%。在供试时间内（15d内），当毒饵浓度为50.000mg/g时，红火蚁的累计死亡率均接近100%。当处理浓度为25.000mg/g时，红火蚁的累计死亡率均超过90%。当处理浓度为12.500mg/g时，J-12毒饵处理的红火蚁的累计死亡率达到90%以上，Stdif6和Stdif9处理的红火蚁的累计死亡率达到60%以上。当处理浓度为6.250mg/g时，Stdif6、Stdif9、J-12毒饵处理的红火蚁的累计死亡率分别超过40%、70%、80%；当处理浓度为3.125mg/g，Stdif6、Stdif9、J-12毒饵处理的红火蚁的累计死亡率分别超过30%、20%、80%。以上结果表明，Stdif6、Stdif9、J-12对红火蚁均表现出较强的毒饵饲喂胃毒活性，J-12在处理浓度为3.125mg/g时，对红火蚁仍可表现出较高的毒饵饲喂胃毒活性。
本研究筛选得到了对红火蚁具有毒杀活性的植物内生真菌Stdif9、Stdif6、J-12、STJ-J-3-6、WZMG-Y-24，其中尤以血散薯内生真菌Stdif6、Stdif9、J-12毒杀活性显著。研究结果为后期进一步研究血散薯内生真菌菌株对红火蚁的毒杀机理奠定了基础，为其应用于红火蚁天然防治剂提供了依据。