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猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种急性、高度传染性的肠道疾病,可感染各年龄段的猪,临床表现为水样腹泻、呕吐和脱水,并伴有厌食和抑郁,其中以哺育仔猪症状最为严重,发病率可达100%,死亡率高达80%～100%。对症治疗治标不治本;而返饲可能造成混合感染;国内现有的商品化PEDV灭活疫苗效果不佳,活疫苗也普遍存在抗原含量低的情况,免疫效果不理想,不能有效控制PED。因此,开发有效的抗病毒药物对于PEDV的防制具有重要意义。1.褪黑激素通过下调ROS抑制PEDV感染褪黑激素（N-乙酰基-5-甲氧基色胺）是一种广泛存在于细菌、真菌、植物和动物中的吲哚胺,可以通过不同的机制,如抗凋亡、抗炎、抗氧化特性在病毒感染过程中发挥作用。活性氧（ROS）与多种生物学反应及细胞器功能有关;反之,脂质降解、线粒体电子传递链中的电子泄漏、内质网腔中的蛋白质折叠、环境压力和炎症反应也会诱发产生ROS。大量研究表明,ROS能够影响病毒与宿主间的关系。因此,该部分研究探索了褪黑激素、ROS与PEDV之间的关系。结果发现,褪黑激素能够降低PEDV感染Vero细胞中病毒N蛋白的表达水平及病毒滴度;PEDV感染促进细胞产生ROS,而ROS清除剂和NADPH氧化酶抑制剂减弱PEDV感染引起的ROS,并抑制PEDV增殖,表明ROS有利于PEDV感染;有趣的是,褪黑激素亦能降低受感染细胞中的ROS水平。总体而言,本研究证明了褪黑激素是一种潜在的抗PEDV活性化合物,能够通过下调受感染Vero细胞中ROS的产生从而抑制PEDV的增殖。2.褪黑激素抑制PEDV依赖于SIRT1-ROS通路SIRT1是Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶成员,其酵母同源物为沉默信息调节因子2（Sir2）,是一种NAD+依赖性的去乙酰化酶,在细胞凋亡、糖脂代谢以及炎症信号传导中发挥关键作用,还具有一定的抗氧化作用。因此,该部分研究探索了 SIRT1对PEDV感染的调节作用及机制。结果发现,PEDV感染或ROS处理均能下调SIRT1蛋白水平;过表达SIRT1不仅抑制PEDV感染,而且下调PEDV感染引起的ROS。更重要的是,结果显示褪黑激素可以上调SIRT1的表达;而沉默SIRT1能够消除褪黑激素对病毒增殖的抑制作用。综上所述,褪黑激素抑制PEDV感染依赖于SIRT1-ROS途径。3.黄连素抑制PEDV感染黄连素（Berberine chloride,C20H19NO4.C1）,又称小檗碱、盐酸小檗碱,是从中药中提取的天然异喹啉生物碱,具有多种生物学功能,并在多种病毒感染过程中显示出抗病毒活性。另有报道提出,PEDV可以诱导细胞凋亡并为病毒复制提供支持。因此,本部分研究探索了黄连素对PEDV的抗病毒活性。结果表明,黄连素处理明显抑制PEDV感染Vero细胞引起的细胞病变并降低了感染细胞内与上清中的病毒粒子量。此外,通过检测黄连素对病毒生命周期不同阶段的影响,发现黄连素抑制了 PEDV的复制和组装,而不影响病毒的吸附、入胞和释放过程。最后,检测细胞凋亡标志蛋白PARP1和caspase7,发现黄连素处理病毒感染细胞中PARP1和caspase7蛋白剪切明显减弱。可见,黄连素是另一种潜在的抗PEDV天然活性化合物。