【摘 要】
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目的:采用大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）的方法建立稳定的大鼠脑缺血模型,明确α2肾上腺素受体激动剂可乐定对脑缺血2 h再灌注4 h大鼠的神经保护作用,并进一步从凋亡途径探讨其具体分子机制。方法:（1）将健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、MCAO模型组、低剂量可乐定（20μg/kg）组、高剂量可乐定（40μg/kg）组、育亨宾（5 m
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目的:采用大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）的方法建立稳定的大鼠脑缺血模型,明确α2肾上腺素受体激动剂可乐定对脑缺血2 h再灌注4 h大鼠的神经保护作用,并进一步从凋亡途径探讨其具体分子机制。方法:（1）将健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、MCAO模型组、低剂量可乐定（20μg/kg）组、高剂量可乐定（40μg/kg）组、育亨宾（5 mg/kg）+高剂量可乐定（40μg/kg）组、MK801阳性药物（0.5 mg/kg）对照组等6个组,按体重分别预给药1周,假手术组和模型组则给同等剂量的生理盐水,然后采用线栓法制备MCAO模型,缺血2 h再灌注4 h,经神经功能缺陷评分后处死取脑行TTC染色,根据神经功能缺陷评分和脑梗死体积评估脑缺血损伤情况;（2）采用HE染色法观察各组大鼠皮层和海马神经元形态,评估神经元损伤情况;（3）进一步采用荧光TUNEL染色法评估各组大鼠皮层和海马细胞凋亡情况;（4）采用免疫印迹法检测各组大鼠缺血侧皮层和海马凋亡相关蛋白的表达情况;（5）采用实时荧光定量PCR法检测各组大鼠缺血侧皮层和海马凋亡相关蛋白mRNA的表达情况。结果:（1）神经功能缺陷评分统计结果显示,与假手术组相比,模型组神经功能缺陷评分显著升高（P<0.01）;与模型组相比,可乐定组评分均有所降低（P<0.05）,MK801组也显著降低（P<0.01）;与低剂量可乐定组相比,高剂量可乐定组评分显著降低（P<0.01）;与高剂量可乐定组相比,育亨宾+高剂量可乐定组评分显著升高（P<0.01）,MK801组则无明显差异。（2）TTC染色脑梗死体积占比统计结果显示,与假手术组相比,模型组脑梗死体积占比显著升高（P<0.01）;与模型组相比,可乐定组占比均有所降低（P<0.05）,MK801组也显著降低（P<0.01）;与低剂量可乐定组相比,高剂量可乐定组占比显著降低（P<0.01）;与高剂量可乐定组相比,育亨宾+高剂量可乐定组占比显著升高（P<0.01）,MK801组则无明显差异。（3）各组大鼠皮层和海马HE染色结果显示,假手术组皮层和海马神经元排列规整紧致,细胞大而圆,胞核清晰可见;与假手术组相比,模型组皮层海马神经元则明显萎缩变形,排列凌乱无序,胞核固缩深染;而经可乐定预处理后细胞萎缩明显好转,受损神经元显著减少（P<0.01）。（4）各组大鼠皮层和海马细胞TUNEL染色统计结果显示,假手术组皮层和海马凋亡阳性细胞极少,呈零星分布;与假手术组相比,模型组皮层和海马凋亡细胞均明显增多,凋亡阳性率显著升高（P<0.01）;与模型组相比,经可乐定预处理后,凋亡细胞均明显减少,凋亡阳性率显著降低（P<0.01）;与高剂量可乐定组相比,育亨宾+高剂量可乐定组凋亡细胞明显增多,凋亡率显著升高（P<0.01）。（5）免疫印迹法检测各组大鼠缺血侧皮层和海马各凋亡相关蛋白统计结果显示:1)与假手术组相比,模型组促凋亡蛋白AIF、Caspase3、P53、p-P53、Bax表达均升高（P<0.05）;与模型组相比,高剂量可乐定组各促凋亡蛋白表达均降低;而与高剂量可乐定组相比,育亨宾+高剂量可乐定组各促凋亡蛋白表达均升高;2)缺血侧皮层与海马抑凋亡蛋白Bcl2、p-Bcl2表达在各组间均未见明显差异。（6）实时荧光定量PCR检测各组大鼠缺血侧皮层和海马各凋亡相关蛋白mRNA统计结果显示:1)a.与假手术组相比,模型组皮层促凋亡蛋白AIF、Caspase3、P53、Bax mRNA表达均显著升高（P<0.05）;与模型组相比,高剂量可乐定组各mRNA表达均显著降低（P<0.01）;而与高剂量可乐定组相比,育亨宾+高剂量可乐定组各mRNA表达升高;b.缺血侧皮层中抑凋亡蛋白Bcl2 mRNA的表达在各组间均无明显差异;2)缺血侧海马中各凋亡相关蛋白mRNA的表达在各组间均无明显差异。结论:（1）α2肾上腺素受体激动剂可乐定能改善急性局灶性大鼠神经功能缺陷评分,减小脑梗死体积,减轻神经元损伤,减少细胞凋亡,对急性局灶性脑缺血大鼠有显著的神经保护作用;（2）可乐定对急性局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用与细胞凋亡关系密切,可能是通过抑制促凋亡相关蛋白AIF、Caspase3、P53、p-P53、Bax等及其mRNA表达发挥作用;而与抑凋亡蛋白Bcl2的表达无关。
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