【摘 要】
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第一部分:毛蕊异黄酮衍生物CA028对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响目的:探讨毛蕊异黄酮衍生物CA028对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:培养MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞株,以不同浓度CA028处理两株乳腺癌细胞48 h后进行检测。采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测CA028对乳腺癌细胞增殖能力的影响;采用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡的变化;采用酶联免疫吸附试验（
【基金项目】
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广西研究生教育创新计划项目（YCSW2021253）
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第一部分:毛蕊异黄酮衍生物CA028对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响目的:探讨毛蕊异黄酮衍生物CA028对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:培养MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞株,以不同浓度CA028处理两株乳腺癌细胞48 h后进行检测。采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测CA028对乳腺癌细胞增殖能力的影响;采用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡的变化;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫蛋白印迹（Western blot）和荧光定量PCR（q RT-PCR）分别测定CA028对乳腺癌细胞中关键凋亡因子的作用。结果:在一定浓度范围内,CA028对MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖具有抑制作用,且随着CA028浓度增加而加强（P＜0.05）。CA028可抑制MDA-MB-231和MCF-7细胞的克隆形成。CA028可诱导MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡;WB及q RT-PCR结果显示:促凋亡因子Bax的蛋白表达及m RNA水平都增高,而抑凋亡因子Bcl-2蛋白表达水平及m RNA都降低（P＜0.05）。结论:毛蕊异黄酮衍生物CA028可以抑制乳腺癌细胞的增殖,并诱导其凋亡。第二部分:基于网络药理学和分子对接预测毛蕊异黄酮衍生物CA028抗乳腺癌的药理靶点和分子机制目的:利用网络药理学和分子对接方法系统预测毛蕊异黄酮衍生物CA028抗乳腺癌核心靶点、生物过程及分子机制。方法:从药物靶点和疾病靶点网络数据库分别获取CA028与乳腺癌相关靶点,然后筛选并获取交集靶点,再利用相应软件和纳入算法筛选核心靶点及构建CA028-BC互作网络图,对核心靶点进行基因本体（GO）注释和KEGG分析,分子对接分析CA028与核心靶点蛋白位点结合活性。采用免疫荧光和WB对核心靶点进行实验验证。结果:网络药理学初步预测获得MAPK1、FYN、MAPK14等17个核心靶点,GO和KEGG富集分析显示核心靶点主要参与调控肿瘤坏死因子反应、凋亡信号通路调控和MAPK、PI3K-AKT信号通路等。此外,结构生物学分析明确CA028与MAPK1、FYN、MAPK14核心蛋白不同位点的有效结合。与癌旁组织相比较,乳腺癌组织中MAPK1、FYN、MAPK14表达水平明显提高,进一步CA028体外干预后,MDA-MB-231和MCF-7细胞中的MAPK1、FYN、MAPK14阳性细胞计数明显减少（P＜0.05）。结论:网络药理学分析揭示了MAPK1、FYN、MAPK14可能是CA028抗乳腺癌的关键药理靶标,其药理机制可能是通过调节免疫功能相关信号通路来干预乳腺癌。第三部分:基于转录组学揭示毛蕊异黄酮衍生物CA028抗乳腺癌的药理靶点和分子机制目的:应用转录组学分析并揭示CA028抗乳腺癌药理靶标和分子调控机制。方法:采用RNA-seq技术检测乳腺癌细胞对照组和CA028处理组的基因表达信息,WB和q RT-PCR实验性验证转录组学结果。结果:乳腺癌细胞对照组与CA028处理组相比,差异表达基因952个,其中,699个上调基因,253个下调基因。Ingenuity Pathway Analysis进一步明确CA028通过调节不同的转录和翻译因子、激酶、磷酸酶和受体参与乳腺癌免疫、癌症信号传导和肿瘤转移。WB和q RT-PCR实验结果表明:CA028可上调MDA-MB-231和MCF-7中AP-1、EGR1、CBL蛋白表达活性及m RNA表达水平,下调MAPK11蛋白表达活性及m RNA水平（P＜0.05）。结论:CA028可能通过调控免疫细胞功能和炎症反应等关键的效应基因及信号通路发挥抗乳腺癌作用。
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