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随着越来越多转基因(genetically modified,GM)植物用于饲料原料,转基因饲料的安全性开始受到广泛的关注。本论文就饲料加工中的温度、压力及时间对转基因大豆、豆粕及饲料产品中内、外源基因及外源蛋白的降解情况进行了研究,为转基因饲料的安全性评价提供科学依据。通过对转基因大豆外源基因和其表达蛋白的分析,选择PCR技术对内、外源基因进行定性检测;采用实时定量PCR技术通过建立标准曲线方程,对转基因大豆的外源基因进行定量,R2值达到0.9959,并具有良好的重现性和灵敏度;选用Western技术检测转基因大豆及豆粕中的cp4 epsps蛋白。将豆粕进行干热、湿热、膨化处理,对处理后豆粕中的转基因成分进行研究,并采集饲料产品加以验证。将豆粕置于7个温度梯度下,分别干热3 min、5 min、10 min,通过对大豆内源基因不同长度的目的基因扩增,研究内源基因经过干热处理之后基因片段的变化情况,结果表明随着温度的增加,内源基因发生降解,温度增高到120℃,处理时间10 min后,lectin基因降解到400 bp以下;温度与蒸汽压力对内源基因的降解是正向相加的,豆粕经过121℃、0.1 MPa处理1min后,407 bp的片段不能检出;本实验以豆粕为原料加工膨化饲料,膨化中的高温、高压使内源基因发生了降解;市场中的饲料产品膨化大豆粉、膨化豆粕、膨化颗粒料、硬颗粒料中内源基因的1060 bp片段不能检测出来,说明也同样发生了降解。豆粕进行干热、湿热、膨化处理后,其外源基因片段也发生了降解。外源基因片段随温度的升高,加热时间的延长降解更严重,经过120℃干热10 min后,降解到408 bp以下;高压对外源基因片段造成了严重的破坏,湿热1 min,外源基因降解到807 bp以下;膨化处理对外源基因的影响不大,膨化以后外源基因降解到1512 bp以下;市场中饲料产品中外源基因的存在情况与膨化处理的结果一致。利用实时荧光定量PCR技术对豆粕经过干热、湿热处理后转基因含量测定,进行饲料加工对转基因含量的研究。高温、高压及处理时间的增加都会使转基因含量减少,豆粕经过120℃加热10 min后,豆粕中转基因含量下降到2.49%,豆粕在121℃、0.1 MPa处理5 min,其转基因含量仅为0.99%。外源基因的表达蛋白的安全性一直以来都受到人们的关注,外源蛋白含量随着温度的增高而减少,在120℃加热3 min后,含量明显下降;高压对外源蛋白的影响更加显著,121℃、0.1 MPa湿热1min后,几乎没有杂交信号,说明cp4 epsps蛋白含量迅速下降;市场中的饲料产品膨化大豆粉、膨化豆粕、膨化颗粒料、硬颗粒料中外源蛋白也都出现降解。