从供、受体细胞准备，重构胚构建与体外培养、妊娠到胎儿出生，核移植的效率受诸多因素的制约，其中供体细胞体外培养是影响体细胞核移植胚胎发育的一个重要方面。为了建立稳定的牛体细胞体外培养方法，本实验对牛耳皮肤成纤维细胞、牛卵巢颗粒细胞和牛输卵管上皮细胞的分离、体外培养方法进行了研究，并对他们的生长特性作了探讨。 研究结果表明： 1．DMEM及1640两种培养液均适合牛耳皮肤的组织培养，M199不适宜牛耳皮肤组织体外培养。 2．冷消化、热消化和冷热结合消化法均能从牛耳皮肤组织块获得较多的成纤维细胞，冷热结合消化法较其它两种消化法可以获得更多的细胞数和更高的细胞贴壁率。 3．采用消化培养法、组织块培养法和消化组织培养法三种方法研究不同培养方法对传代牛耳成纤维细胞生长的影响，消化组织培养法较其它两种方法能获得较高的细胞贴壁率、活细胞率和较短的培养周期，是一种较好的牛耳成纤维细胞的体外培养方法。 4．37℃，0.25％胰酶+0.02％EDTA是较为适合牛卵巢颗粒细胞传代用的消化条件。 5．在体外培养的条件下，耳成纤维细胞(0-2代)、颗粒细胞(0-4代)和输卵管上皮细胞(0-3代)发生染色体数目变化的几率较小(＜10％)，可以用作体细胞核移植的供核细胞。 6．培养液体积对于原代颗粒细胞贴壁效果的影响远远大于培养空间的影响，6孔培养板中1.33mL是一个较适宜培养体积，而不同培养空间之间对于原代颗粒细胞的贴壁效果影响并不明显。