目的:动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）导致的冠状动脉病变相关的心血管病已成为21世纪导致发达国家和发展中国家主要死亡原因的心血管病之一,鉴于AS的高发病率和高死亡率给整个社会带来的经济和生活负担,寻找高效的AS的防治措施迫在眉睫。炎症反应与AS的发生发展密切相关,且内皮损伤是初始因素。而近年来,越来越多的研究表明免疫反应与AS息息相关。细胞焦亡（pyroptosis）,一种不同于凋亡的程序性细胞死亡形式,作为先天免疫的重要组成部分,通过引起炎症反应以及与AS发生相关的细胞焦亡而诱导AS的发生。血管内皮细胞对于血管稳态的重要性不言而喻,同时血管损伤又是AS发生的第一步,因此,积极寻找减轻或抑制内皮细胞焦亡以及内皮炎症反应的新机制和可能的药物靶点是AS的防治重点。炎性小体NLRP3作为先天免疫的感受器,参与心血管疾病的发生,在致病因素的刺激下,其活化会引起半胱天冬酶-1（caspase-1）依赖的细胞焦亡这一经典途径发生,从而启动AS的发生。因而,抑制NLRP3的活化成为抑制内皮细胞焦亡的重要靶点和近年药物抑制剂的研发方向。褪黑素（Melatonin,Mel）是一种主要由人松果体分泌的具有人体昼夜节律调控功能的吲哚胺类激素,其化学名为N-乙酰基-5甲氧基色胺。大量研究显示褪黑素具有强大的清除自由基,抗衰老,抑制肿瘤生长,抗氧化应激,抗线粒体凋亡等作用。本实验室已有研究证实Mel能够显著改善低剪切力诱导的内皮损伤,进一步探究其对血管内皮细胞焦亡的作用及相关分子机制对于AS的防治具有重要价值,并且为AS的临床药物研发提供新依据。因此本实验主要通过棕榈酸诱导内皮细胞损伤,并使用褪黑素干预,观察其对细胞活力的影响及焦亡相关分子表达水平的变化。方法:倒置相差显微镜观察不同浓度棕榈酸诱导及褪黑素干预后血管内皮细胞的形态变化;电子扫描显微镜观察血管内皮细胞形态;使用CCK8法检测不同浓度棕榈酸作用24小时对EA.hy926细胞活力的影响,以及褪黑素干预对EA.hy926细胞活力的影响;使用Western Blotting法检测不同浓度棕榈酸作用24小时诱导血管内皮细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1p20、GSDMD-N等蛋白表达水平;使用Western Blotting法检测空白对照组、棕榈酸处理组,褪黑素干预组血管内皮细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、GSDMD-N蛋白表达水平。结果:倒置显微镜不同视野下观察:与对照组相比,不同浓度的棕榈酸能够诱导内皮细胞死亡,降低细胞密度,并引起内皮细胞形态变化,尤其当PA浓度高于400μM达到500μM,细胞死亡数目明显增加,细胞形态改变显著;电子扫描显微镜结果显示:与对照组相比,棕榈酸能够诱导内皮细胞发生典型的细胞焦亡形态（焦亡小体）;CCK8法检测发现PA能够显著降低EA.hy926的细胞活力,并且随着PA的浓度增加,细胞活力降低越明显,而经过褪黑素干预后能够改善内皮细胞活力;Western Blotting法检测发现PA可显著提高血管内皮细胞中NLRP3、caspase-1、caspase-1p20、GSDMD-N表达;并且随着棕榈酸浓度不断提高焦亡相关蛋白表达水平也越高;而PA诱导的血管内皮细胞经过褪黑素干预后NLRP3、caspase-1、GSDMD-N等蛋白表达水平与对照组相比无明显变化,而与PA组比较有显著差异。结论:棕榈酸对血管内皮细胞活力有明显抑制作用,棕榈酸能够诱导内皮细胞焦亡的形态学改变,此外,棕榈酸能够诱导血管内皮细胞中NLRP3、caspase-1、GSDMD-N等细胞焦亡相关蛋白水平增加,具有浓度依赖性;而褪黑素干预能够抑制棕榈酸诱导的血管内皮细胞焦亡,从而减轻内皮细胞损伤。