【摘 要】
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目的:体外研究外源性硫化氢(GYY4137)对绝经后骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞(BMMSC)增殖和成骨分化的生物学影响及探讨其可能机制。方法:取绝经后骨质疏松性骨折行全髋置换治疗的患者20名,术中自股骨近端做骨髓取样用于细胞培养。采用全骨髓贴壁法行原代细胞培养获得h-BMMSC,利用流式细胞技术鉴定。以有限稀释法纯化获得纯度较高的原代h-BMMSC。MTT法检测外源性H_2S供体GYY4137
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目的:体外研究外源性硫化氢(GYY4137)对绝经后骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞(BMMSC)增殖和成骨分化的生物学影响及探讨其可能机制。方法:取绝经后骨质疏松性骨折行全髋置换治疗的患者20名,术中自股骨近端做骨髓取样用于细胞培养。采用全骨髓贴壁法行原代细胞培养获得h-BMMSC,利用流式细胞技术鉴定。以有限稀释法纯化获得纯度较高的原代h-BMMSC。MTT法检测外源性H2S供体GYY4137对h-BMMSC增殖能力的影响并筛选GYY4137的最佳干预量-效浓度。进一步实验,取培养至第3代的h-BMMSC,将其分为对照组(h-BMMSC)和实验组(GYY4137+h-BMMSC)。将细胞分别培养至1th/7th/14th/21th,使用裂解法收集两组h-BMMSC的RNA,并实施RT-PCR检测,将两组细胞成骨相关性基因的mRNA表达变化进行比较。于培养至第7th/14th/21th时,采用茜素红(ARS)染色方法检测两组细胞中矿化结节的形成状况并进行ARS量化分析。所得数据录入SPSS 25.0软件实施统计学意义上的分析。最后,通过综述探讨H2S促进h-BMMSC增殖和成骨分化的可能信号通路调控机制。结果:流式细胞鉴定显示90%以上的细胞表型呈CD90/73双重阳性、CD34/45阴性。MTT检测结果显示,100μM浓度的GYY4137最能有效刺激h-BMMSC的增殖能力,且刺激时长与细胞增殖成正比。RT-PCR检测结果显示,于第7和14天,实验组成骨性相关基因的表达明显高于对照组(P<0.01);第21天,两组的成骨性基因表达均下降(实验组下降较为明显,P<0.01)。经茜素红染色后,7、14、21天时镜下观察,实验组与对照组相比矿化结节量明显增多。ARS量化分析结果组间比较(OD值:F7th=6.88,F14th=38.58,F21th=38.56;P<0.05)。文献综述提示,Wnt/β-catenin信号通路可能是GYY4137对h-BMMSC成骨分化的主要调控机制。结论:外源性H2S(GYY4137)可以促进绝经后骨质疏松症患者BMMSC的增殖和成骨分化。此外,这种作用的机制可能是通过调节Wnt/β-catenin信号通路来实现的。
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