岩藻糖化糖胺聚糖(Fucosylated glycosaminoglycan，FG)是来源于海洋棘皮动物的一类结构新颖的糖胺聚糖衍生物。天然FG不仅有强效抑制内源性因子Ⅹase(FⅩase)的活性，也具有AT和/或HCⅡ依赖的FⅡa抑制活性，同时还存在激活血小板和FⅫ的副作用。本课题组前期对FG寡糖的研究表明，FG九糖(h9c)为强效的选择性FⅩase抑制剂，其具有低出血倾向的抗血栓活性特征。因此，本文进一步制备得到了h9c结构修饰产物，研究了h9c抑制FⅩase活性的机制，并探讨FG系列寡糖的结构、活性及其与靶蛋白相互作用的构效关系。　　一、h9c衍生物制备与结构鉴定:为探讨h9c抑制FⅩase的构效关系以及特定取代基团对其活性的影响，本文首先根据h9c的结构及其所含取代基的化学性质特点，制备了h9c的衍生物，其包括:　　(1) h9c羧基还原产物(h9c-1，还原程度约为100％);　　(2)羧基乙酯化产物(h9c-2，酯化程度约为75％);　　(3)脱乙酰化产物(h9c-3，脱乙酰化程度约为46％)。　　所述h9c衍生物的化学结构均通过1H/13C-和2D NMR谱图解析确认，并进一步通过质谱检测确证。　　二、h9c抑制FⅩase活性的分子机制研究:　　(1)纯因子系统的研究结果显示，h9c浓度依赖地抑制FⅩase酶解活化FⅩ的活性，其抑制活性符合非竞争性抑制模型，表明h9c与FⅩase的结合位点不同于FⅩ; h9c结合FⅩase的表观亲和力较LMWH强约1.85倍;h9c对FⅨa/PL的活性无抑制作用，表明其作用位点并非FⅨa的酶活位点;h9c不影响FⅧa活性的衰减速率;h9c可浓度依赖地减弱FⅨa-FⅧa的表观亲和力，影响FⅨa-FⅧa复合物的形成，这可能是其抑制FⅩase活性的主要原因。此外，h9c对FⅩase活性的衰减有一定的促进作用，这可能与其影响FⅨa-FⅧa的结合从而导致FⅧa易于失活相关。　　(2)分子间相互作用的研究结果显示，FⅨa、FⅧ和FⅩ结合固相化九糖(wy9)均呈现两相结合特征，FⅨa可高亲和力结合固相化的wy9(KD1:2.52×10-7M，KD2:1.02×10-9 M)，FⅧ与wy9也存在较强的亲和力，而FⅩ结合wy9的亲和力很弱;AT、HCⅡ和FⅡa与固相化wy9的结合为单相结合，HCⅡ和FⅡa与wy9结合的亲和力相对较强，而AT结合wy9的亲和力较弱。此与wy9存在较强的FⅩase抑制活性、有较弱的HCⅡ依赖的抗FⅡa活性而无AT依赖的抗凝血因子活性相一致。竞争性结合试验的结果表明h9c和LMWH可能有相似的FⅨa结合位点，其结合FⅨa的亲和力约为LMWH的2.2倍。　　三、h9c抑制FⅩase活性的构效关系研究:　　(1) h9c衍生物活性检测的结果显示，羧基还原显著降低了h9c的抗凝活性和FⅩase抑制活性，而羧基乙酯化和脱乙酰化对其活性的影响相对较小。竞争性结合试验的结果则显示，羧基还原会显著降低h9c与FⅨa的亲和力，而羧基乙酯化和脱乙酰化的影响相对较小，表明羧基是h9c高亲和力结合FⅨa、抑制FⅩase活性的必需基团。　　(2)对SvFG亚硝酸解聚和β-消除解聚得到的系列寡糖的研究结果表明，寡糖的APTT延长活性、FⅩase抑制活性、结合FⅨa的亲和力均随聚合度的降低而下降，其中九糖(wy9)和八糖(wb8)分别为两类系列寡糖中具有强效FⅩase抑制活性并可高亲和力结合FⅨa的最小结构片段。比较不同序列结构的九糖发现，九糖还原端的anTal-diol(wy9)或GalNAc4s6s-ol(wb9)并非其发挥活性和结合靶蛋白的必需结构，九糖侧链岩藻糖2，4-位硫酸酯基取代(wy9)的活性和结合FⅨa的亲和力要略强于3，4-位硫酸酯基取代(cy9)。　　综上所述，FG九糖(h9c)可高亲和力结合FⅨa，通过影响FⅨa-FⅧa的结合从而发挥其强效FⅩase抑制活性，羧基是h9c高亲和力结合FⅨa、抑制FⅩase活性的必需基团，羧基酯化和脱乙酰化的影响相对较小。FG八糖(wb8)具有与九糖类似的活性和结合靶蛋白的亲和力，九糖还原端的乙酰氨基半乳糖可能并非其结合FⅨa的必需结构，九糖侧链岩藻糖2，4-位硫酸酯基取代可能具有更强的活性和结合靶蛋白的亲和力。