马铃薯ARF基因RNAi载体的遗传转化及对其试管薯生理特性的影响

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lovepengchen
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ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)是Ras基因超家族的成员,它们是大小约20kDa的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白,属于小G蛋白超家族中的ARF亚家族。ARF作为霍乱毒素催化GS蛋白ADP核糖基化反应的辅助因子,最早被发现并纯化命名为ARF。本研究通过农杆菌介导法将组成型表达启动子CaMV35S驱动的ARF基因的RNA干扰表达载体导入到马铃薯栽培品种“甘农薯2号”中,获得了转ARF基因马铃薯植株,并对其试管薯的生理指标进行测定,以期研究ARF基因对马铃薯生理特性的影响,从而为进一步研究ARF基因在马铃薯块茎中的作用提供一定的理论基础。取得的主要研究结果有:1.以马铃薯栽培品种“甘农薯2号”的无菌试管苗为供体材料,诱导试管薯。用含有组成型表达启动子CaMV35S驱动的ARF基因的RNA干扰表达载体pHellsgatearf1进行遗传转化,经Kan抗性筛选获得了56株转化植株。2.设计特异性引物,对获得的转化植株进行PCR检测。对其进行nptⅡ基因、组成型表达启动子CaMV35S以及ARF基因干扰片段的PCR检测,再通过qRT-PCR检测分析ARF基因在转基因马铃薯试管薯中的表达量。结果显示在转基因株系Z-1、Z-2、Z-5、Z-9、Z-11、Z-12中ARF基因的干扰程度达到35.23%-93.22%,尤其在株系Z-11和Z-12中,ARF基因表达的干扰程度分别高达92.53%和93.22%。3.对检测呈阳性的转基因植株,进行试管薯的诱导,并对其试管薯的淀粉、蛋白质、可溶性糖、蔗糖和葡萄糖含量进行测定。试验结果表明,与未转基因植株相比,转基因植株的淀粉含量提高了4.29%-34.27%;而蛋白质含量仅有株系Z-2、Z-7、Z-11提高了1.47%-7.35%,其余株系的蛋白质含量均有所下降;可溶性糖含量提高了1.44%-17.39%;蔗糖含量提高了11.53%-53.84%,而葡萄糖含量降低了6.06%-21.21%。
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