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四季秋海棠是一种常见的园林植物,它花期长、姿态优美,其生长发育常常受到低温和高光等环境因子的影响。目前,低温、高光胁迫下四季秋海棠生物合成代谢途径已有相关报道,但逆境下的调控机制尚不明确。课题组前期已完成低温、高光胁迫下四季秋海棠叶片转录组的测序,本研究从转录组数据中选取7个候选内参基因分析了它们在三组胁迫条件下的稳定性、克隆和分析了 个与低温和高光相关的BsMYB62转录因子。并以低温、高光胁迫下四季秋海棠的叶片为材料,构建了用于酵母双杂交的cDNA文库和BsMYB62转录因子的诱饵载体,筛选出BsMYB62转录因子的互作蛋白。主要研究成果如下:1.不同处理条件下四季秋海棠叶片样品中内参基因的表达稳定性不同,各样品中又有表达相对稳定的内参基因。用GeNorm和NormFinder两个软件对Bs18S、BsPPR、BsACT、BsDNAJ、BsGAPDH、BsNAD-ME和BsCYP这7个候选内参基因进行稳定性评估,结果显示,在非生物胁迫样品中,BsACT、BsCYP和BsGAPDH稳定性较好,适合作为内参基因,以BsGAPDH和BsCYP组合稳定性最佳;在生物胁迫样品中,BsACT、BsDNAJ、BsNAD-ME和BsPPR稳定性较好,适合作为内参基因,以BsACT、BsDNAJ和BsNAD-ME组合稳定性最佳;在低温胁迫样品中,BsACT、BsPPR和Bs18S稳定性较好,适合作为内参基因,以BsACT和BsPPR组合稳定性最佳。2.从四季秋海棠中克隆了一个MYB转录因子,命名为BsMYB62。该基因CDS区长801bp,编码的氨基酸共266个,含有MYB结构域,属于R2R3型MYB。BsMYB62转录因子的相对分子质量为30608.91,理论等电点pI为6.25,总原子数为4236,BsMYB62转录因子编码蛋白属于亲水蛋白,二级结构主要是αt-螺旋和无规则卷曲,含52个磷酸化位点,21个糖基化位点:BsMYB62转录因子编码蛋白为无跨膜结构域的非分泌型蛋白;系统进化树分析发现BsMYB62与大麻MYB62亲缘关系最近,其次是咖啡MYB62。3.BsMYB62在低温及高光胁迫下的表达分析显示:BsMYB62的表达量在低温及高光的影响下均有明显的增加。低温胁迫下,BsMYB62的表达量在整个处理阶段均高于CK,处理3h后显著增加,6h和2d先后达到峰值,处理12d后达到最大值。在高光胁迫下,BsMYB62的表达量在6h、12h和2d几个时间点先后达到峰值,处理12d后也达到最大值。BsMYB62在低温和高光条件下表达量可显著上调,推测BsMYB62可能参与调控四季秋海棠对低温和高光胁迫的应答过程。4.以Invitrogen体系成功构建了四季秋海棠叶片的酵母cDNA文库。初级文库的总克隆数达1.04×107,经试验鉴定,重组的成功率达到96%,平均插入片段大于1kb;次级文库的总克隆数达1.2×107,经试验鉴定,重组的成功率达到100%,平均插入片段大于1kb;文库质粒转入Y187酵母后文库滴度为6.0×107cfu/mL,工作液细胞密度大于3×107cells/mL。5.构建了 pGBKT7-BsMYB62诱饵载体,诱饵转化酵母后的毒性和自激活检测表明,BsMYB62诱饵蛋白无毒性,可自激活。3-AT浓度筛选试验结果表明,含45mM 3-AT的SD/-Trp-Leu-His-Ade 培养基能明显抑制BsMYB62蛋白的自激活现象,SD/-Trp-Leu-His-Ade/3-AT45mM平板可用于酵母双杂交筛选BsMYB62的互作蛋白。6.采用Mating法完成了文库筛选试验,共获得12个与四季秋海棠BsMYB62互作的阳性蛋白。在TAIR平台进行测序结果的比对分析,结果显示这些蛋白分别为XTH9、LHB1B2、EBS7、PSI-F、UBE2、FDH、RBCS1A、FP6和BCA4,它们分别参与寒冷应答、光诱导和木葡聚糖代谢等多种生物过程,推测BsMYB62可能通过与这些蛋白互作来调控四季秋海棠对低温和高光胁迫作出应答。