灭活屎肠球菌静脉注射抗沙门氏菌感染小鼠作用研究

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益生菌作为一种饲料添加剂,被广泛应用于畜禽规模化养殖中,其饲喂效果也得到了畜牧从业者和学者的广泛认可。近几年本实验室将屎肠球菌进行高温高压灭活制备成注射剂对小鼠进行静脉注射,发现其具有良好的免疫增强和疾病防治作用。在本实验室前期的研究工作中发现,静脉注射灭活屎肠球菌制剂对感染沙门氏菌的小鼠有一定的保护作用,于是本课题进一步较深入地开展了相关研究,希望为沙门氏菌性疾病的防治提供新的途径和手段。主要研究内容及结果如下:首先制备灭活屎肠球菌注射液,将常规MRS培养24h的屎肠球菌离心保留沉淀,进行生理盐水洗涤并配成混悬液,于121℃、压力0.12MPa灭活15min,使用THOMA细菌计数板计数,调整菌量为1.0×10~9CFU/m L,将此浓度作为1×剂量,以此为依据可以制备不同倍数的灭活屎肠球菌注射剂。实验以清洁级昆明种小白鼠为研究对象,分别设计了正常对照组、沙门氏菌模型组、1×剂量给药组和2×剂量给药组,每组10只小鼠,雌雄各半。给药方案为预防给药,给药24h接种沙门氏菌。分别开展了灭活屎肠球菌静脉注射对沙门氏菌感染小鼠的保护率、组织病理学、器官细菌载量、血液及脾脏和肠系膜淋巴结中免疫细胞以及血液中抗体和细胞因子的影响研究。结果如下:(1)小鼠尾静脉注射灭活屎肠球菌24h后接种沙门氏菌感染小鼠,连续观察15天发现,1×给药组和2×给药组均可以极显著地降低感染沙门氏菌小鼠的死亡数。(2)组织病理学检测结果显示,沙门氏菌模型组小鼠心脏全部出现心肌细胞坏死、炎细胞浸润,而1×给药组小鼠有4只出现此病变,2×给药组小鼠有5只出现此病变,其他小鼠无明显病理变化;沙门氏菌模型组小鼠肝脏全部出现肝细胞坏死及单个核细胞浸润,炎性肉芽肿,肝细胞出现坏死灶,1×给药组小鼠有6出现此病变,2×给药组小鼠有5只出现此病变,其他小鼠无明显病理变化;沙门氏菌模型组小鼠脾脏全部出现红髓和白髓间间隙增大,红髓体积增大,可见多种免疫细胞(巨噬细胞为主、中性粒细胞、树突状细胞、淋巴细胞)数量增多,1×给药组小鼠有7只出现此病变,2×给药组小鼠有6只出现此病变,其他小鼠无明显病理变化。各组小鼠肺脏和肾脏无明显病理变化。(3)载菌量试验表明,1×给药组和2×给药组分别与沙门氏菌模型组相比较,均极显著降低了小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的沙门氏菌载量。(4)细胞免疫测定显示,1×给药组、2×给药组与沙门氏菌模型组相比极显著地(P<0.01)提高了小鼠血液、脾脏和肠系膜淋巴结中B细胞、CD4+细胞、Treg细胞的数量,其中1×给药组血液中CD4+细胞数量恢复到了正常对照组水平;2×给药组肠系膜淋巴结B细胞、CD4+细胞、Treg细胞数量超过正常对照组水平。(5)体液免疫和细胞因子检测显示,1×给药组、2×给药组与沙门氏菌模型组相比,均极显著地提高小鼠血清中Ig G和IFN-γ含量(P<0.01);1×给药组、2×给药组小鼠血清中IgA与沙门氏菌模型组相比差异极显著(P<0.01);1×给药组、2×给药组小鼠血清中IL-2与沙门氏菌模型组相比差异显著(P<0.05);1×给药组、2×给药组小鼠血清中IgA、IFN-γ和IL-2浓度与正常对照组无显著差异,说明其恢复到了正常水平。综上所述,灭活屎肠球菌完整形态菌体静脉注射对感染沙门氏菌小鼠具有良好的保护作用,可能与调节机体免疫功能有关。
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