【摘 要】
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禽白血病是由反转录病毒科禽反转录病毒属的禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的,能使禽类患不同良性及恶性肿瘤的一种疾病。ALV会使家禽各项机能受到抑制,体重增长缓慢、产蛋量下降、免疫抑制等亚临床症状出现,禽白血病给我国的养禽业造成了重大经济损失。依据该病毒在细胞培养,病毒相互干扰模式存在着不同程度的差别,不同的宿主范围及抗原结构在囊膜蛋白上的区别等情况,ALV可以分
【基金项目】
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国家自然科学基金项目:中英全球食品安全:家禽健康发展中的肿瘤病控制项目（31761133002）； 国家自然科学基金项目（3177130834）；
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禽白血病是由反转录病毒科禽反转录病毒属的禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的,能使禽类患不同良性及恶性肿瘤的一种疾病。ALV会使家禽各项机能受到抑制,体重增长缓慢、产蛋量下降、免疫抑制等亚临床症状出现,禽白血病给我国的养禽业造成了重大经济损失。依据该病毒在细胞培养,病毒相互干扰模式存在着不同程度的差别,不同的宿主范围及抗原结构在囊膜蛋白上的区别等情况,ALV可以分为A-J十个亚群,以及新鉴定的K亚群,A、B、C、D、E、J六个亚群出现时间最早且可感染家禽,其中A亚群和B亚群是外源性禽白血病病毒,常见于商品蛋鸡养殖。A亚群白血病病毒主要感染蛋鸡,以引发淋巴细胞瘤为主,是禽白血病的主要病原体,J亚群发现的晚,但是传染性最强,是目前主要的流行的禽白血病亚群。目前在临床上对于ALV的防控没有有效疫苗和药物,只能通过该病毒的定期监测,严格淘汰受检阳性鸡只,净化鸡群。但目前禽白血病的检测方法大多存在时间长、操作麻烦、不易分型甚至出现假阳性率高的问题,因此,急需建立新的敏感、特异、快速、高效、实用的检测方法。本研究建立的禽白血病A、J亚群荧光RPA快速检测方法,针对该亚群保守且特异的gp85片段,分别设计多对引物及探针。A亚群荧光RPA快速检测方法通过优化反应时间及反应终浓度筛选出最佳引物及探针,试验结果显示检测多个禽病毒核酸,只扩增A亚群病毒核酸,说明该方法特异性高,敏感性可达100 copies/μL,批内重复试验变异系数在1.14%～3.73%,批间重复性试验变异系数在0.53%～3.69%,重复性良好,在临床样品检测上,与普通PCR检测结果相一致,符合率为100%;本研究同时也建立了J亚群荧光RPA快速检测方法,首先对J亚群病毒进行分离鉴定,成功分离到流行毒株,并构建J亚群标准质粒应用于该方法的建立,试验结果显示J亚群荧光RPA快速检测方法,检测多个禽病毒核酸,只扩增J亚群病毒核酸,说明该方法特异性高,敏感性试验最低检测限值可达10 copies/μL,批内重复试验变异系数在0.59%～3.82%,批间重复性试验变异系数在0.64%～4.61%,重复性良好,在临床检测应用中与普通PCR方法符合率为92%,荧光RPA检测阳性样品的核酸产物经测序分析均为ALV-J亚群,该方法更敏感。A、J亚群荧光RPA恒温快速检测方法的建立为ALV病毒分型检测及现场检测提供技术及支持,对ALV防制与净化具有重要意义。
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