Drp1、Marf对线粒体形态结构及其功能影响

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目的:通过构建Drp1(dynamin-related protein 1)、Marf(mitoechondrial assembly regulatory factor)转基因果蝇,探讨Drp1、Marf对果蝇间接飞行肌的影响,以及Drp1、Marf对线粒体形态结构的调控及其功能影响的相关性研究。方法:使用MHC-Gal4启动子,利用经典的GAL4/UAS系统,使果蝇线粒体形态调控基因Drp1和Marf特异性表达于肌肉组织中。通过敲除Drp1和过表达Marf基因干预调控其在果蝇肌肉线粒体的表达,改变线粒体的形态,观察果蝇翅膀的异常形态以及飞行能力,并通过透射电子显微镜观察果蝇肌肉组织间接飞行肌肌肉的排列和线粒体的形态学是否改变。通过ATP试剂盒检测线粒体ATP产能功能,并进一步应用Western Blot蛋白免疫印迹技术检测线粒体氧化呼吸链复合物I亚单位NDUFS3蛋白量表达量,来探讨Drp1、Marf对线粒体线粒体功能的影响。结果:相比于对照组,通过敲除Drp1和过表达Marf基因均使果蝇间接飞行肌发生障碍,表现为飞行能力变差,翅膀的异常率增高;电镜可观察到Drp1、Marf的转基因果蝇胸部肌肉组织线粒体呈融合状态,形态结构受损,果蝇间接飞行肌肉排列不规则,肌纤维存在断裂。线粒体氧化呼吸产生的ATP含量减少以及Western Blot蛋白检测线粒体氧化呼吸复合物I亚单位NDUFS3蛋白表达含量均明显下调。结论:敲除Drp1和过表达Marf基因果蝇模型都可以改变线粒体的形态结构,影响果蝇的飞行功能;敲除Drp1和过表达Marf基因的果蝇模型都可以使线粒体功能下调;推测无论是线粒体分裂受限还是融合过度,都会使线粒体功能发生障碍。
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