论文部分内容阅读
目的:建立高分辨熔解曲线分析(high-resolutionmeltingcurveanalysis，HRMA)技术检测中国人群急性髓系白血病(acutemyloidleukemia，AML)、骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome，MDS)和慢性髓系白血病(chronicmyeloidleukemia，CML)中剪接因子3b亚基1（splicingfactor3bsubunit1，SF3B1）基因的突变。
方法:收集按FAB（French-American-British，法-美-英）和WHO(WorldHealthOrganization，世界卫生组织)分型标准诊断的初诊AML患者275例、CML患者81例、MDS患者92例骨髓标本，用人淋巴细胞分离液(Ficoll-Hypaque)分离骨髓单个核细胞，DNA抽提试剂盒提取基因组DNA。针对SF3B1基因热点突变位点（密码子E622、H662、K666及K700）设计PCR扩增引物，建立带有温度内标校准品的PCR扩增反应体系，在ABI7300PCR扩增仪上分别对这些基因进行扩增，应用HRMA对相应PCR产物进行突变检测，并对HRMA检测结果进行DNA测序验证。
研究结果:(1)HRMA检测SF3B1基因突变灵敏度:HRMA检测SF3B1K666T突变的最大灵敏度为5％，高于直接DNA测序的灵敏度(10％);检测SF3B1K700E突变的最大灵敏度为5％，高于直接DNA测序的灵敏度(25％)。(2)AML患者中SF3B1基因突变:275例初诊AML患者中3例(1.1％)检出SF3B1突变，均为杂合性突变，包括1例K666T、1例K666N和1例K700E。3例突变者均见于正常核型。其中1例同时伴有核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin1，NPM1)与DNA甲基转移酶3A（DNAmethyltransferases3A，DNMT3A）突变，1例同时伴有FMS样酪氨酸激酶3-内部串联重复(fms-liketyrosinekinase3-intenaltandemduplication，FLT3-ITD)与DNMT3A突变，另外1例伴有NPM1突变。(3)MDS患者中SF3B1基因突变:92例MDS患者检出5例(5.4％)SF3B1突变，均为杂合性，包括3例K700E、1例H662Q和1例K666M突变;5例SF3B1突变患者主要见于难治性贫血伴有环状铁粒幼红细胞（refractoryanemiawithringsideroblast，RARS）及难治性血细胞减少伴有多系发育异常和环状铁粒幼细胞(refractorycytopeniawithmultilineagedysplasiaandringsideroblasts,RCMD-RS)亚型(33％比2％,P=0.006);伴或不伴SF3B1突变者性别、年龄、血红蛋白含量、血小板计数及生存时间方面并无显著性差异（P＞0.05）;根据染色体核型分组，5例SF3B1突变患者均为好或中等的染色体核型;根据国际预后评分系统(InternationalPrognosticScoringSystem，IPSS)分组，5例突变均发生于IPSS低危组或中危-1组患者。(4)CML患者中SF3B1基因突变:CML患者中未检测出SF3B1突变。
结论:(1)HRMA是一种快速、重复性好、灵敏度高、高通量的SF3B1基因突变筛选技术，可以用于对临床大批量标本进行基因突变筛选;(2)SF3B1基因突变主要见于伴有环形铁粒幼细胞(ringsideroblasts，RS)的MDS亚型;(3)SF3B1基因突变在AML及CML患者中是一个罕见的分子事件。